Бесплатная выписка из егрн: Можно ли заказать выписку из ЕГРН Росреестра бесплатно

Содержание

Бесплатная выписка из ЕГРН на сайте Росреестра » Абинское городское поселение

Бесплатная выписка из ЕГРН на сайте Росреестра

На сайте Росреестра в разделах «Физическим лицам» и «Юридическим лицам» реализована возможность получения выписки из Единого государственного реестра недвижимости (ЕГРН) о кадастровой стоимости объекта недвижимости.

Выписка содержит следующие сведения: вид и кадастровый номер объекта недвижимости, величину его кадастровой стоимости и даты ее утверждения и внесения в ЕГРН, даты подачи заявлений о пересмотре кадастровой стоимости и начала применения кадастровой стоимости. Сведения из ЕГРН о кадастровой стоимости объекта недвижимости можно запросить по состоянию на любую дату.

Для подачи запроса о предоставлении выписки из ЕГРН о кадастровой стоимости объекта недвижимости, необходимо указать: кадастровый номер объекта недвижимости, субъект РФ, в границ которого расположен объект недвижимости, паспортные данные заявителя, а также выбрать форму предоставления выписки (в электронном виде или на бумажном носителе). Срок предоставления документа – 5 рабочих дней.

Закон № 218-ФЗ «О государственной регистрации недвижимости» вступил в силу 1 января 2017 года. Он объединил ранее существовавшие государственный кадастр недвижимости и единый реестр прав в Единый государственный реестр недвижимости (ЕГРН), облегчив процедуры регистрации недвижимости и прав на нее.

На сайте Росреестра (http://rosreestr.ru) возможно подать запрос и на получение других видов выписок из ЕГРН:

1.1.Об основных характеристиках и зарегистрированных правах на объект недвижимости;

1.2.О правах отдельного лица на имевшиеся (имеющиеся) у него объекты недвижимости;

1.3.О переходе прав на объект недвижимости;

1.4.О содержании правоустанавливающих документов.

Плата за предоставление вышеуказанных документов взимается в соответствии с действующим доказательством.

Пресс-служба ФГБУ «ФКП Росреестра» по Краснодарскому краю

Вернуться назад

Возможно ли получить выписку из ЕГРН бесплатно?

В государственной системе РФ существует два варианта выписок из ЕГРН.

Выписка из Единого государственного реестра налогоплательщиков. Такая выписка предоставляется бесплатно в налоговой службе.
Выписка из Единого государственного реестра недвижимости. Такая выписка предоставляется Росреестром и подлежит плате. Бесплатную выписку из ЕГРН (бывший ЕГРП) об объекте недвижимости, согласно приказу № 291 Минэкономразвития РФ, могут получить: правоохранительные органы, нотариусы, судебные приставы, пенсионный фонд, уполномоченные по правам человека.

Выписка из ЕГРН на объект недвижимости может быть предоставлена как на бумажном носителе за подписью и печатью, так и в электронном виде с электронной цифровой подписью. Оба вида документа являются официальными ответами Росреестра.

Срок предоставления электронной выписки из ЕГРН по закону составляет 3 рабочих дня.

На практике нашим сервисом электронные выписки из ЕГРН на недвижимость формируются не более одного дня.

Срок предоставления выписки из ЕГРН на бумажном носителе по закону составляет до 5 рабочих дней, плюс 3-5 дней берет МФЦ на доставку документов. Бумажную выписку из ЕГРН с синей печатью можно получить и за 1 день, но данная услуга может быть предоставляется в случае надлежаще-оформленного заявления на имя начальника регистрационной палаты с указанием причин срочности и при согласии органов Росреестра удовлетворить Ваше ходатайство.

В случае заказа выписки из ЕГРН на недвижимость с печатью на нашем сайте, мы берем всю процедуру оформления срочного запроса на себя и гарантированно предоставляем документ на следующий день.

Перечень предоставляемых услуг

Выписка из ЕГРН
онлайн
от 5 минут
Перейти
Выписка из ЕГРН
об объекте с печатью
1 день
Перейти
Выписка из ЕГРН
на лицо (собственность лица)
1-3 дня
Перейти
ВЫПИСКА ИЗ ЕГРН
о зарегистрированных ДДУ
1-2 дня
Перейти
СПРАВКА ИЗ ЕГРН
о правоустанавливающих документах
1-2 дня
Перейти
РАСШИРЕННАЯ ИСТОРИЯ
объекта недвижимости
2-4 дня
Перейти
Выписка из ДЖП
до 1998 года
2 дня
Перейти
Архивная выписка
из домовой книги
1-2 дня
Перейти
Архивная выписка
из ЦАБ
1-2 дня
Перейти
ЭКСПЛИКАЦИЯ
и поэтажный план (БТИ)
1 день
Перейти

ТЕХНИЧЕСКИЙ ПАСПОРТ
помещения (БТИ)
1 день
Перейти
ЗАГС
проверка физ.лица

2-4 дня
Перейти
ПНД и НД
проверка физ.лица
2-4 дня
Перейти
ВСЯ СОБСТВЕННОСТЬ ЛИЦА

проверка через ФНС
2 дня
Перейти
ВСЕ ПАСПОРТА ЛИЦА
форма Ф-1
1 день
Перейти
Договор купли-продажи
недвижимости
2-3 часа
Перейти
Договор дарения
недвижимости
2-3 часа
Перейти
Сопровождение сделки
с недвижимостью
«под ключ»
Перейти
Стать нашим партнером
по предоставлению выписок
внедрение на Ваш сайт — 15 минут
Перейти

Граждане могут заказать выписку о кадастровой стоимости объекта недвижимости не выходя из дома

Выписку из Единого государственного реестра недвижимости (ЕГРН) о кадастровой стоимости объекта недвижимости можно получить в электронном виде в режиме онлайн с помощью сайта Федеральной кадастровой палаты (http://kadastr.ru/), не выходя из дома. Для этого на сайте нужно найти вкладку «Электронные услуги и сервисы» и выбрать «Получение сведений из ЕГРН». Затем, следуя подсказкам системы, заполнить необходимый запрос установленной формы. После подачи запроса заявители могут самостоятельно отследить статус рассмотрения своего обращения с помощью сервиса «Проверка состояния запроса online».

Выписка из ЕГРН о кадастровой стоимости объекта недвижимости в электронном виде предоставляется по запросам любых заинтересованных лиц в течение трех рабочих дней со дня получения органом регистрации прав запроса от заявителя.

Выписка из ЕГРН о кадастровой стоимости объекта недвижимости предоставляется бесплатно. На основании одного запроса в виде выписки из ЕГРН предоставляются сведения об одном объекте недвижимости.

Обращаем внимание, что сведения из ЕГРН в виде выписки из ЕГРН о кадастровой стоимости объекта недвижимости выдаются заявителю, если указанный в запросе объект недвижимости поставлен на государственный кадастровый учет. Если сведения об объекте недвижимости отсутствуют в ЕГРН, то заявителю выдается уведомление об отсутствии запрашиваемых сведений. В этом случае заинтересованное лицо может обратиться в орган регистрации прав с заявлением о постановке на государственный кадастровый учет, либо с заявлением о внесении сведений о ранее учтенном объекте недвижимости, приложив необходимые документы.

Согласно статистике, электронный вид запроса о предоставлении сведений из ЕГРН о кадастровой стоимости объекта недвижимости значительно превышает бумажный. Так, с января по сентябрь 2017 года в филиал ФГБУ «ФКП Росреестра» по Республике Коми поступило около 40 000 запросов из ЕГРН о кадастровой стоимости объектов недвижимости, причем более 67% из них — в электронном виде.

молекул | Бесплатный полнотекстовый | Антиоксидантная и антипролиферативная активность метанольного экстракта из заброшенного сельскохозяйственного продукта: кукурузных початков

2.1. MEC усиливает антиоксидантную активность in vitro

Полярные растворители, такие как этанол, этилацетат, ацетон и т. Д., Широко используются для экстракции антиоксидантных компонентов из растительных материалов. Однако экстракция метанолом часто приводит к более высокому извлечению общего количества экстрагируемых соединений [22]. Таким образом, мы выбрали работу с метанольным экстрактом.Благодаря своим физико-химическим характеристикам высокой растворимости фенольных соединений в органических растворителях, эти молекулы, вероятно, участвуют в составе антиоксиданта, содержащегося в метанольных экстрактах. В метанольном экстракте, полученном в нашей работе, общее содержание фенолов, белков и углеводов составляло 1,4: 0,001: 0,001 соответственно, что указывает на то, что наблюдаемые биологические активности, вероятно, связаны с фенольными соединениями из-за их доли по сравнению с белками и углеводами. Большое количество фенольных соединений в метанольных экстрактах очень распространено, даже в тех, которые получены из NAP, таких как древесина и околоплодник Caesalpinia decapetala [23].

Фенольные соединения считаются важными антиоксидантами, поэтому в нашей работе мы решили оценить антиоксидантный потенциал метанольного экстракта из кукурузных початков (MEC), и для этого были использованы различные антиоксидантные тесты. Антиоксиданты — это соединения, которые могут предохранять биологические и химические вещества от окислительного повреждения, вызванного радикалами. Поскольку радикальное окисление субстратов происходит посредством цепной реакции, включающей три стадии (т.е. инициирование, распространение и завершение), антиоксиданты проявляют свое действие через различные механизмы.Таким образом, мы использовали различные методы для оценки влияния экстракта кукурузных початков на стадии инициации (общая антиоксидантная способность, анализ DPPH и снижение мощности), размножения (хелатирование железа) и прекращения (активность улавливания супероксидных и гидроксильных радикалов).

Первоначально MEC оценивали в тесте, известном как общая антиоксидантная способность (TAC) [24]. Метанольный экстракт показал TAC относительно 98,03 мг AAE (эквивалент аскорбиновой кислоты) / г образца. Материал, экстрагированный растворителем, был довольно эффективным в снижении содержания молибдена в анализе, что указывает на высокий антиоксидантный потенциал образца.Значения TAC, полученные с помощью MEC, были аналогичны другим натуральным экстрактам [21,25], даже по сравнению с другим исследованием, в котором проводился анализ TAC с метанольным экстрактом [26]. MEC также показал высокую активность по улавливанию радикалов DPPH; максимальная активность была достигнута при использовании примерно 10 мкг / мл образца, что достигло значения 50% поглощения DPPH (рис. 1). Результаты MEC по поглощению DPPH были аналогичны результатам α-токоферола — известного антиоксидантного соединения — и только в высоких концентрациях этот витамин превосходил активность MEC (рис. 1).Ли и др. [27] получили экстракты плодов боярышника с использованием различных органических растворителей и оценили их антиоксидантную способность. По сравнению со всеми условиями экстракции в цитируемой выше работе, наш метанольный экстракт из кукурузных початков достиг значения в 10 раз выше, чем улавливание DPPH.

Рисунок 1. Поглощение активности DPPH in vitro MEC. Активность метанольного экстракта представлена непрерывной линией. Пунктирная линия показывает активность известного антиоксиданта α-токоферола.МЭК и положительный контроль использовали в одинаковых концентрациях (0; 0,5; 1,0; 2,5; 5,0; 10; 15 мкг / мл). Буквы ^{a, b, c, d, e} указывают на существенные различия между различными концентрациями одного и того же образца. ^{x, y} Представляют значительную разницу между разными образцами при одинаковых концентрациях. Тест Стьюдента-Ньюмана-Кеулса (p <0,05).

Рисунок 1. Поглощение активности DPPH in vitro MEC. Активность метанольного экстракта представлена непрерывной линией.Пунктирная линия показывает активность известного антиоксиданта α-токоферола. МЭК и положительный контроль использовали в одинаковых концентрациях (0; 0,5; 1,0; 2,5; 5,0; 10; 15 мкг / мл). Буквы ^{a, b, c, d, e} указывают на существенные различия между различными концентрациями одного и того же образца. ^{x, y} Представляют значительную разницу между разными образцами при одинаковых концентрациях. Тест Стьюдента-Ньюмана-Кеулса (p <0,05).

В другом исследовании метанольный экстракт кукурузных початков показал активность около 16% по улавливанию радикалов в том же анализе DPPH [28].Разница в результатах по сравнению с нашими данными может быть связана с исходными свойствами. Когда кукуруза подвергается различным периодам солнечной радиации, влажности, температуры и осадков в течение года, это может привести к синтезу различных пропорций молекул, которые будут влиять на активность экстракта. Антиоксидантные свойства экстракта пшеничных отрубей были оценены в другое исследование и его способность улавливать свободные радикалы в отношении DPPH были ниже, чем у MEC [29].Способность улавливать радикал DPPH также измерялась с метанольным экстрактом пшеничных отрубей, другим NAP [30]. В этой работе были оценены экстракты отрубей из пяти сортов пшеницы, произрастающих в Пакистане, и ни один из образцов не показал значения поглощения DPPH выше, чем MEC. В дополнение к описанным тестам, многообещающие результаты были получены в анализе снижающей способности. Таким образом, этот метод оценивает способность образца отдавать электроны в присутствии хлорида железа в кислых условиях и, таким образом, восстанавливать Fe ⁺³ до Fe ⁺².MEC показал значения оптической плотности выше, чем аскорбиновая кислота, когда мы использовали ту же массу для проведения теста (рис. 2). Результаты, полученные с использованием MEC, были выше, чем результаты, полученные с другими экстрактами метанола, такими как результаты, полученные с экстрактом Armillaria mellea, который требовал концентрации в пять раз выше, чем MEC, для проявления такой же активности [31]. Это показывает, что МЭК обладает большой способностью донора электронов к атомам железа в слабокислой среде, и в этом случае экстракт может действовать как антиоксидант.

Рисунок 2. Снижение силового эффекта МЭК in vitro. Тест показывает способность образца восстанавливать ионы железа Fe ³⁺ до Fe ²⁺. Активность метанольного экстракта представлена сплошной линией. Пунктирная линия показывает активность уже известного антиоксиданта (аскорбиновой кислоты). МЭК и аскорбиновую кислоту использовали в следующих концентрациях: 0; 20; 40; 80; 120; 160; 300 мкг / мл. ^{a, b, c, d, e} Обозначает существенные различия между различными концентрациями одного и того же образца.^{x, y} Представляют значительную разницу между разными образцами при одинаковых концентрациях. Тест Стьюдента-Ньюмана-Кеулса (p <0,05) Поглощение при 700 нм.

Рисунок 2. Снижение силового эффекта МЭК in vitro. Тест показывает способность образца восстанавливать ионы железа Fe ³⁺ до Fe ²⁺. Активность метанольного экстракта представлена сплошной линией. Пунктирная линия показывает активность уже известного антиоксиданта (аскорбиновой кислоты).МЭК и аскорбиновую кислоту использовали в следующих концентрациях: 0; 20; 40; 80; 120; 160; 300 мкг / мл. ^{a, b, c, d, e} Обозначает существенные различия между различными концентрациями одного и того же образца. ^{x, y} Представляют значительную разницу между разными образцами при одинаковых концентрациях. Тест Стьюдента-Ньюмана-Кеулса (p <0,05) Поглощение при 700 нм.

Мы использовали два метода, которые оценивают способность / способность образца отдавать электроны, потому что мы пытались смоделировать ситуации, которые могут быть обнаружены в живых организмах.Поскольку химическая среда каждого метода различна, молекула может проявлять хорошую активность в одном методе, но не в другом. Согласно результатам TAC и уменьшающей способности, MEC обладает способностью к донорству протонов и может служить в качестве ингибиторов свободных радикалов и действовать на стадии инициации окисления клеточных соединений, предотвращая разложение определенных молекул в различных условиях окружающей среды, обнаруженных в клетках. вроде как лизосомы, так и митохондрии.

MEC не проявлял активности ни в одном из условий, используемых для испытания хелатирующей способности железа и анализа активности по улавливанию гидроксилов.Хелатирующая способность соединения определяется как образование связей между двумя или более отдельными сайтами связывания в одной и той же молекуле и одним центральным атомом. Эту характеристику обычно приписывают органическим соединениям, таким как полисахариды, которые, связываясь с атомами металлов, образуют хелат [32]. Анализируя таким образом, убедительные признаки заставляют нас полагать, что отсутствие активности МЭК в анализе хелатирующей способности железа было связано с низким содержанием полисахаридов в экстракте. Некоторые свободные радикалы образуются в митохондриях в результате системы транспорта электронов, осуществляемой в этом экстракте. органелла [23].Избыточные электроны могут выходить из этой митохондриальной системы и вступать в реакцию с молекулярным кислородом с образованием многих активных форм кислорода (АФК). Молекулярный кислород с дополнительным электроном, называемым супероксид-анионом, чрезвычайно реактивен и может способствовать окислительной деградации липидов и важных белков, что увеличивает вероятность дегенеративных заболеваний, таких как болезнь Альцгеймера [33]. Данные, представленные в этой статье, показали, что MEC обладает значительной активностью по улавливанию супероксид-анионов со значениями около 97.Активность 4% ± 3,7% достигается при низких количествах (40 мкг / мл), активность, которая остается постоянной при более высоких количествах МЭК (рис. 3). Другие метанольные экстракты показали высокую активность по улавливанию супероксид-анионов, например экстракты из плодов и цветов Hypericum lydium Boiss (около 100% активности по улавливанию супероксид-анионов). Однако количество экстракта, использованного для получения этой активности, было намного выше (10 мг / мл) [34] по сравнению с использованным экстрактом MEC. В другой работе с использованием NAP измеряли активность экстракта кожуры арахиса (экзокарпия) по улавливанию свободных радикалов и активных форм кислорода; максимальная поглощающая активность была достигнута только при использовании 500 мкг / мл образца, что в 10 раз ниже, чем у MEC [35].Наши результаты подтверждают сильную способность MEC улавливать супероксид-анионы. В целом, антиоксидантные данные, полученные с использованием MEC, предполагают многообещающий антиоксидантный потенциал кукурузных початков. Кроме того, это может улучшить использование кукурузных початков и снизить загрязнение окружающей среды.

Рисунок 3. Активность МЭК по улавливанию супероксидных радикалов in vitro. Метанольный экстракт достигает максимальной активности при концентрации пробы 40 мкг / мл. Используемые концентрации образцов были 0; 2,5; 5.0; 10; 20; 40; 50 мкг / мл.Буквы ^{a, b, c, d, e} указывают на существенные различия между различными концентрациями одного и того же образца. Тест Стьюдента-Ньюмана-Кеулса (p <0,05).

Рисунок 3. Активность МЭК по улавливанию супероксидных радикалов in vitro. Метанольный экстракт достигает максимальной активности при концентрации пробы 40 мкг / мл. Используемые концентрации образцов были 0; 2,5; 5.0; 10; 20; 40; 50 мкг / мл. Буквы ^{a, b, c, d, e} указывают на существенные различия между различными концентрациями одного и того же образца.Тест Стьюдента-Ньюмана-Кеулса (p <0,05).

2.2. Влияние MEC на клетки Антиоксидантные ферменты

Среди различных причин мутаций в генетическом материале повреждение ДНК, вызванное повышенным окислительным стрессом, является решающим событием для увеличения количества значительных изменений в этой важной молекуле. Большое количество мутаций может ухудшить серьезность опухолевых клеток, может изменить поведение этих клеток, позволяя им проникать в близлежащие ткани или распространяться на органы, удаленные от места происхождения.Опухолевые клетки часто имеют ослабленную антиоксидантную систему, и неоднократно происходит системный сбой из-за мутаций в важных генах, участвующих в восстановлении поврежденных молекул, помимо дефицита ферментов и соединений для борьбы с окислительным стрессом [36,37].

Поскольку мы продемонстрировали, что MEC проявляет антиоксидантную активность, это побудило нас исследовать, будет ли линия раковых клеток человека (клетки HeLa), обработанная MEC, отображать какие-либо изменения в окислительно-восстановительном статусе. Для этого проверяли экспрессию каталазы (CAT), супероксиддисмутазы (SOD) и металлотионеина (MT) в клетках HeLa.

Антиоксидантная ферментная система представляет собой эффективное средство борьбы с активными формами кислорода. Каталаза — важный фермент, который катализирует разложение пероксида водорода до воды и кислорода [38], в то время как МТ связывается с атомами металлов и снижает образование гидроксильных радикалов [39], а SOD катализирует дисмутацию супероксида в кислород и пероксид водорода [40]. Обработка клеток HeLa MEC привела к изменению количества продуцируемого антиоксидантного белка (рис. 4).Экспрессия CAT и MT была выше в обработанных клетках, что указывает на то, что MEC оказывает антиоксидантное действие в этих клетках за счет увеличения внутриклеточной продукции ключевых антиоксидантных ферментов.

Рисунок 4. Влияние MEC на уровень CAT, SOD и MT в клетках HeLa. График представляет отношение белка, нормализованного к актину. ( A ) Фермент каталаза; ( B ) MT — Металлотионеин; ( C ) SODMn — супероксиддисмутаза. В правом верхнем углу представлены изображения вестерн-блоттинга задействованных белков.Буквы ^{a, b, c, d} указывают на существенные различия между различными концентрациями одного и того же образца. Тест Стьюдента-Ньюмана-Кеулса (p <0,05).

CAT увеличивался примерно в 2,5 раза в присутствии 20 мкг / мл MEC (рис. 4A). МТ увеличилось примерно в 8,0 раз при использовании 50 мкг / мл экстракта (рис. 4В). Другой важный фермент, участвующий в клеточном антиоксидантном процессе, — это СОД; количество этого фермента увеличивалось только в 1,5 раза в присутствии MEC (5 мкг / мл) по сравнению с контролем.Однако количество фермента уменьшается пропорционально увеличению количества используемого экстракта (рис. 4C).

2.3. Антиоксидантный потенциал MEC

in vivo Поскольку мы продемонстрировали, что MEC проявляет антиоксидантную активность in vitro и в клеточной системе, это побудило нас лечить нормальных крыс MEC, чтобы обнаружить любые изменения в их окислительно-восстановительном статусе. Таким образом, была определена эквивалентная антиоксидантная способность (TEAC) тролокса в сыворотке и печени крысы, отравленной CCl ₄. Согласно результатам, приведенным в таблице 1, витамин E (положительный контроль) и MEC вызывают увеличение значений TEAC по сравнению с группой CCl ₄.Эта повышенная антиоксидантная активность в образцах после введения MEC может указывать на прямую абсорбцию нескольких антиоксидантных соединений.

Таблица 1. Влияние MEC на печень и сыворотку Trolox-эквивалент антиоксидантной способности (TEAC), MDA, CAT и SOD у крыс, отравленных CCL4.

Группа 7 0,97 ± 0,39 б 0.76 Активность SOD и CAT в печени и сыворотке снизилась после обработки CCl ₄ (Таблица 1), вероятно, из-за ряда вредных эффектов, вызванных накоплением трихлорметильных радикалов (CCl ₃ •) и трихлорметилпероксильных радикалов (CCl ₃ O). ₂ •), которые появляются у крыс, потому что CCl ₄ метаболизируется в системе цитокрома P450, давая оба реактивных вида.Кроме того, поскольку активность СОД и КАТ низка, CCl ₃ O ₂ • и другие химически активные вещества вызывают перекисное разрушение липидных мембран клеток, что приводит к образованию перекисей липидов, которые продуцируют малоновый альдегид (МДА). МДА — один из важнейших биомаркеров перекисного окисления липидов. Таким образом, как и ожидалось, CCl ₄ увеличил количество MDA в образцах (таблица 1). MEC восстановил уровни MDA даже в присутствии CCl ₄, вероятно, потому, что MEC восстановил активность SOD и CAT.Мы показали, что присутствие MEC в культуре клеток увеличивало уровень CAT (Рисунок 4), что частично оправдывает эффекты MEC in vivo. Однако мы также показали, что МЭК снижает количество СОД в клетках. Кроме того, мы предположили, что уровни СОД в клетках снижаются из-за высокой активности улавливания супероксидных радикалов МЭК. Таким образом, мы полагаем, что соединения MEC, ответственные за активность поглощения супероксидных радикалов MEC, абсорбировались в небольших количествах или не абсорбировались и / или они быстро метаболизировались у крыс.Кроме того, мы предполагаем, что эффекты MEC на антиоксидантные ферменты могут быть связаны с его способностью блокировать вредные эффекты реактивных видов, возникающие в результате биотрансформации CCl ₄. Однако для получения более подробной информации о действиях МЭК in vivo необходимы дальнейшие исследования.

2.4. МЭК проявляет антипролиферативную и проапоптотическую активность

Помимо антиоксидантной активности, природным экстрактам из нескольких источников приписывается и другая фармакологическая активность, например способность ингибировать или уменьшать пролиферацию опухолевых клеток [41,42].Таким образом, чтобы исследовать потенциал MEC в качестве антипролиферативного агента, клетки HeLa обрабатывали MEC, а жизнеспособность клеток оценивали по снижению MTT. Рисунок 5 показывает, что MEC резко снижает жизнеспособность клеток HeLa. MEC показал IC ₅₀ для антипролиферативной активности 10 мкг / мл с 80% ингибированием роста клеток при 40 мкг / мл. Кверцетин, фенольное соединение, используемое в качестве положительного контроля, показал IC ₅₀ 1,5 мкг / мл (данные не показаны).

Рисунок 5. Влияние MEC на пролиферацию клеток HeLa, измеренное с помощью теста MTT.Пролиферацию клеток HeLa проводили в присутствии или в отсутствие МЭК (0; 2,5; 5,0; 10; 20; 40; 50 мкг / мл). Буквы ^{a, b, c, d} указывают на существенные различия между различными концентрациями одного и того же образца. Тест Стьюдента-Ньюмана-Кеулса (p <0,05).

Рисунок 5. Влияние MEC на пролиферацию клеток HeLa, измеренное с помощью теста MTT. Пролиферацию клеток HeLa проводили в присутствии или в отсутствие МЭК (0; 2,5; 5,0; 10; 20; 40; 50 мкг / мл). Буквы ^{a, b, c, d} указывают на существенные различия между различными концентрациями одного и того же образца.Тест Стьюдента-Ньюмана-Кеулса (p <0,05).

В другом исследовании метанольные экстракты использовались для оценки способности подавлять пролиферацию опухолевых клеток. Экстракт конского каштана, который ингибирует около 79% пролиферации клеток HeLa при 125 мкг / мл, оказался эффективным [43]. Ren et al. [44] использовали 80 мкМ клитоцина, очищенного соединения, которое снижало жизнеспособность клеток HeLa примерно на 90%, антипролиферативный эффект, аналогичный тому, который показали результаты MEC. Экстракт, полученный из побочных продуктов оливкового масла, ингибировал пролиферацию клеток рака груди MDA-MB-231 с 6 мг / мл экстракта [45].Таким образом, когда мы сравнили эти данные с антипролиферативной активностью MEC, мы могли сделать вывод, что MEC обладает более высоким противоопухолевым потенциалом.

Кроме того, чтобы определить, обладает ли МЭК (от 2,5 до 50 мкг / мл) неспецифической цитотоксичностью для любого типа клеток, мы также проверили влияние МЭК на рост 3T3, нормальной линии клеток фибробластов. С этой линией клеток MEC показала ингибирование роста клеток (20%) только при максимальной дозе (50 мкг / мл; данные не показаны).

Затем мы оценили, связано ли действие MEC как антипролиферативного агента с индукцией апоптоза.Процесс гибели клеток включает несколько событий, тесно связанных с дисфункцией митохондриальных и плазматических мембран и производством белков, участвующих в разрушении клеток. Апоптоз — это хорошо описанный механизм запрограммированной гибели клеток и важное событие в естественном развитии многоклеточных организмов. Соединения, которые вызывают гибель опухолевых клеток в результате апоптоза, имеют большое значение, поскольку в процессе апоптоза не задействованы каскады клеточного воспалительного процесса и, следовательно, они не влияют на соседние нормальные клетки [46].Таким образом, чтобы исследовать, индуцирует ли MEC апоптотические события в опухолевых клетках HeLa, были проанализированы белки, связанные с гибелью клеток в результате апоптоза. Отношение Bax / Bcl-2 является важным параметром для оценки процесса апоптоза [47]. Повышенное количество Bax и уменьшенное Bcl-2 обеспечат большую проницаемость митохондриальной мембраны из-за образования пор белком семейства Bax, и этот факт высвободит факторы, участвующие в гибели клетки [48]. Опухолевые клетки HeLa, обработанные MEC, показали увеличение экспрессии белка Bax, в то время как белок Bcl-2 снизился (фиг. 6).

Рисунок 6. Влияние MEC на несколько уровней белков, участвующих в гибели клеток. График представляет отношение белка, нормализованного к актину. ( A ) белок Bcl-2; ( B ) белок Bax; ( C ) про-каспаза 3; ( D ) PKC — протеинкиназа; ( E ) в коробке, соотношение Bax / Bcl-2. В правом верхнем углу представлены изображения вестерн-блоттинга задействованных белков. Буквы ^{a, b, c, d} указывают на существенные различия между различными концентрациями одного и того же образца.Тест Стьюдента-Ньюмана-Кеулса (p <0,05).

Таким образом, соотношение Bax / Bcl-2 имеет высокие значения с максимумом 9,6, когда мы использовали концентрацию MEC 20 мкг / мл (рис. 6F). Таким образом, мы предполагаем, что антипролиферативный механизм MEC связан с его способностью индуцировать высвобождение митохондриальных белков, участвующих в гибели клеток. Увеличение апоптотических факторов в цитоплазме способствует активации ферментов, тесно связанных с апоптотическими событиями, таких как цистеин-аспарагиновая кислота. семейство кислотных протеаз (каспаз).Каспазы существуют в виде неактивных проферментов, называемых прокаспазами, которые подвергаются протеолитическому процессингу с образованием субъединиц, которые димеризуются с образованием активного фермента [49]. Каспаза-3 активируется в апоптотической клетке как по внешним (гибельный лиганд, обычно на поверхности цитоплазматической мембраны), так и по внутренним (митохондриальный, комплекс апоптосом) путям [50]. Согласно результатам, полученным в настоящем исследовании, концентрация МЭК 20 мкг / мл снижает количество прокаспазы 3 (рис. 5).

Помимо упомянутых здесь белков, важную роль в процессе апоптоза играют другие белки и протеазы. Семейства киназных протеинов, такие как протеинкиназа C (PKC), играют центральную роль в клеточном метаболизме. В нашем исследовании было замечено, что клетки HeLa, обработанные 20 мкг / мл MEC, показали значительное увеличение (примерно в 4 раза) экспрессии PKC. Следовательно, эта киназа может играть решающую роль в механизме действия MEC. Однако для подтверждения этой гипотезы необходимы дальнейшие исследования.

Экстракт листьев Coccoloba alnifolia как потенциальная антиоксидантная молекула с использованием анализов in vitro и in vivo

Род Coccoloba широко используется в традиционной народной медицине, но для этого рода существует мало научных данных. Целью этого исследования было охарактеризовать химический состав и антиоксидантную активность экстрактов листьев C. alnifolia с использованием анализов in vitro и in vivo . Было получено шесть экстрактов: гексан (HE), хлороформ (CE), этанол (EE), метанол (ME), водный экстракт (WEE) и водный экстракт (WE).Анализ с помощью тонкослойной хроматографии (ТСХ) показал присутствие фенолов, сапонинов, терпенов и флавоноидов. Анализы in vitro продемонстрировали значительный антиоксидантный потенциал, особенно для полярных экстрактов (EE, ME, WEE и WE). Более того, не наблюдали токсических эффектов на клеточных линиях млекопитающих для большинства экстрактов в оцененных концентрациях. Нематода Caenorhabditis elegans также использовалась в качестве модели in vivo для тестирования антиоксидантного потенциала. EE и WE были выбраны на основе ранее полученных результатов.Было замечено, что ни EE, ни WE не оказывали токсического действия на развитие C. elegans . Кроме того, антиоксидантный потенциал оценивали с использованием трет, -бутилгидропероксида в качестве стрессорного агента. EE увеличил продолжительность жизни C. elegans на 28% по сравнению с контролем, а WE увеличил диапазон до 39,2-41,3%. Высокоэффективная жидкостная хроматография (HPLC-DAD) показала присутствие галловой кислоты, p, -кумаровая кислота и витексин в WE.Таким образом, данные in vitro и in vivo продемонстрировали антиоксидантный потенциал экстрактов C. alnifolia и их возможное биотехнологическое применение.

1. Введение

Свободные радикалы вырабатываются как нормальная часть метаболизма митохондриями, пероксисомами, фагоцитозом, воспалительными процессами, ишемией и физическими упражнениями [1]. Баланс между производством и нейтрализацией активных форм кислорода (АФК) антиоксидантными системами очень важен, а дисбаланс имеет тенденцию к перепроизводству АФК, что приводит к так называемому окислительному стрессу [2, 3].

Кроме того, клетки обычно являются мишенями для активных форм, таких как активные формы кислорода (ROS), активные формы азота (RNS) и активные формы серы (RSS). Этот дисбаланс может повредить молекулы, такие как белки, липиды, ДНК и РНК, и привести к метаболическим нарушениям и заболеваниям, таким как рак, сердечно-сосудистые заболевания, диабет, атеросклероз, инсульт, неврологические расстройства, почечные расстройства, заболевания печени, гипертония и ревматоидный артрит. среди других, связанных с окислительным стрессом [2–5].

Растения производят смесь соединений, известных как вторичные метаболиты, которые обладают различными биологическими и фармакологическими свойствами. Известно, что эти вторичные метаболиты обладают антиоксидантным потенциалом, который важен для поддержания этого окислительного баланса. Эти молекулы могут быть получены из различных тканей растений, таких как листья, кора, корни и плоды [6]. Таким образом, идентификация и выделение соединений являются важными темами исследований в этой области [7].

Polygonaceae (Caryophyllales) насчитывает приблизительно 51 род и 1100 видов, распространенных в различных биомах по всему миру.Некоторые виды используются в качестве декоративных растений, некоторые культивируются в лечебных целях, а некоторые имеют экономическое значение для поставки древесины для производства предметов домашнего обихода [8]. Род Coccoloba состоит примерно из 46 видов. Из них 21 являются эндемиками Бразилии и распространены в нескольких биомах: лес Амазонки, Атлантический лес, Каатинга, Бразильская саванна (Серрадо) и Пантанал. Растения Coccoloba имеют сочлененные стебли, чередующиеся и цельные простые листья с суженными прилистниками и артериями.Это травянистые, кустарниковые, древесные или лианы [9].

Химический состав Coccoloba был описан; он содержит тритерпены, дитерпены, антрахиноны, фитостероиды, алкалоиды, бензоиды, сапонины, флавоноиды, дубильные вещества, галловую кислоту, эпигаллокатехин, галлат, миристин-3-O-8-рамнозид, β -β-ситостерол бетулиновые кислоты, карбоновые кислоты, сложные эфиры, альдегиды, эллаговая кислота, бензойная кислота, o -кумаровая кислота, рутин, мирицетин и кверцетин [10–12].Виды C. uvifera , C. cereifera и C. mollis были оценены как ларвицидные средства против комаров Aedes aegypti [13], а также противогрибковые [14], цитотоксические [15], противомикробные средства. [10], древесные биофунгицидные и фитопатогенные бактериальные [12].

Coccoloba alnifolia , широко известная как «pau-de estalo» или «cabuçu», является одним из эндемичных бразильских видов этого рода. Несмотря на все эти виды использования в традиционной народной медицине, нет никакой научной информации о составе вторичных метаболитов C.alnifolia , ни об их возможной биологической активности. Целью этого исследования было охарактеризовать химический состав и антиоксидантную активность экстрактов C. alnifolia с использованием моделей in vitro и in vivo . Пять экстрактов листьев были получены путем последовательной экстракции (с использованием аполярных растворителей в полярные растворители), а шестой экстракт был приготовлен только с водой (исходя из народного использования). В целом эти экстракты не влияли на жизнеспособность шести различных клеточных линий млекопитающих.Кроме того, анализы in vitro, и in vivo, показали четыре полярных экстракта, EE, ME, WEE и WE, которые были источниками молекул антиоксидантов. Более того, экстракты EE и WE не влияли на плодовитость нематод Caenorhabditis elegans , использованных в качестве тестовой модели. Таким образом, листья Coccoloba alnifolia обладают отличным потенциалом для разработки лекарственных трав и в качестве антиоксидантных продуктов.

2. Материалы и методы

2.1. Реагенты

Феррицианид калия, сульфат железа II, трихлоруксусная кислота и серная кислота были приобретены в компании Merck (Дармштадт, Германия).Нитро-синий тетразолий (NBT), моносахариды, диаминоэтантетрауксусная кислота (EDTA), D-глюкоза, галловая кислота, аскорбиновая кислота, белок бычьего сывороточного альбумина, аскорбиновая кислота, метионин, 3- (4,5-диметилтиазолил-2) -2,5 — дифенилтетразолийбромид (МТТ), пирокатехиновый фиолетовый, рибофлавин, молибдат аммония и трет-бутилпероксид водорода (t-BOOH) были приобретены у Sigma-Aldrich Co. (Сент-Луис, Миссури, США). Бикарбонат натрия, заменимые аминокислоты и фосфатно-солевой буфер (PBS) были приобретены у Invitrogen Corporation (Burlington, ON, Canada).Среда Игла, модифицированная Дульбекко (DMEM), и фетальная бычья сыворотка (FBS) были получены от CULTILAB (Campinas, SP, Brazil). Пенициллин и стрептомицин были получены от Gibco (Форт-Уэрт, Техас, США). Все остальные растворители и химические вещества были аналитической чистоты от Synth (Diadema, SP, Бразилия).

2.2. Растительный материал

Coccoloba alnifolia зрелых листьев были собраны в мае 2015 г. с образца, расположенного в Парке дас Дунас, Натал, RN, Бразилия (зона UTM 250257315 м E 9357108 м N — GPS Garmin Etrex).Этот регион соответствует биому Атлантического леса. После идентификации в Гербарий УФРН был депонирован ваучер за номером: УФРН 17133. Исследование было зарегистрировано в СИСБИО за №. 54064-1, SISGEN нет. A39FD4C.

2.3. Приготовление экстрактов

После сбора урожая свежие листья были разделены на мелкие кусочки и перенесены в колбу в соотношении 1:10 () (100 г свежих листьев на 1000 мл растворителя) для мацерации в течение 24 часов для каждого использованного растворителя. . Метод последовательной экстракции был осуществлен с использованием различных растворителей в следующем порядке от аполярных до полярных растворителей, таких как гексан (HE), хлороформ (CE), этанол (EE), метанол (ME) и водный экстракт (WEE).Подход, использованный для приготовления экстрактов, заключался в последовательной экстракции с использованием различных растворителей, при которой листья мацерировали, и добавляли каждый растворитель (аполярный к полярным растворителям) в течение 24 часов. Затем листья фильтровали и возвращали в колбу, и добавляли следующий растворитель. Таким образом, водный экстракт (WEE) соответствует последнему растворителю, используемому для этой последовательной экстракции. Идея последовательной экстракции отделила соединение на основе растворителя. Кроме того, экстракт, приготовленный с использованием только воды — WE — был основан на народном использовании.

Для предотвращения легкого разложения колбу покрывали алюминиевой фольгой. Затем его помещали на встряхивающий стол при 150 об / мин на 24 ч при 24 ° C (Tecnal Shacker). Экстракт фильтровали через ватман № 1. Листья переносили обратно в колбу со следующим растворителем после серийной экстракции в тех же условиях. Экстракты сушили в ротационном испарителе (Tecnal – TE 210) при 40 ° C. Экстракты восстанавливали в 1% ДМСО (Merck), затем лиофилизировали (Labconco FreeZone 4.5). Все экстракты ресуспендировали в воде до конечной концентрации 100 мг / мл (исходный экстракт) и хранили при -18 ° C до использования.

2.4. Общее содержание сахара, фенольных соединений и белка

2.4.1. Всего сахаров

Для проверки количества сахаров в экстрактах использовали метод фенола-H ₂ SO ₄ и D-глюкозу (Sigma-Aldrich) в качестве стандарта. Общее количество сахаров измерялось при 490 нм (Hitachi U-2000 Tokyo, Japan) [16].

2.4.2.Общее количество фенольных соединений

Общее количество фенольных соединений измеряли с использованием метода Folin Ciocalteu, и галловую кислоту (Sigma-Aldrich) использовали в качестве стандарта. Его измеряли при 765 нм (BioTek Epoch Microplate, Калифорния, Калифорния, США) [17].

2.4.3. Общие растворимые белки

Общее содержание белка измеряли с использованием метода Брэдфорда, и белок бычьего сывороточного альбумина (Sigma-Aldrich) использовали в качестве стандарта. Реакцию измеряли при длине волны 595 нм (BioTek Epoch Microplate, Калифорния, Калифорния, США) [18].

2,5. Антиоксидантная активность in vitro

Каждый анализ антиоксиданта проводили в трех экземплярах и повторяли три раза. Все показания были сделаны с использованием спектрофотометра BioTek Epoch Microplate (Калифорния, Калифорния, США). Экстракты из C. alnifolia использовали в концентрации 250 мк г / мл.

2.5.1. Общая антиоксидантная способность (TAC)

Антиоксидантную активность измеряли с учетом восстановления Mo ⁺⁶ до Mo ⁺⁵ растительными экстрактами и последующего образования комплекса зеленый фосфат / Mo ⁺⁵ при кислом pH.Используемая концентрация экстракта составляла 250 мк ( г / мл), который был смешан с 600 мМ серной кислоты молибдата аммония), и его инкубировали при 100 ° C в течение 90 мин [19]. По истечении этого времени смесь выдерживали при комнатной температуре для охлаждения и измеряли оптическую плотность при 695 нм. Результаты сравнивали с отрицательным контролем (дистиллированная вода). Общая антиоксидантная способность выражалась в эквивалентах аскорбиновой кислоты (ЕАА / г).

2.5.2. DPPH

Антиоксидантную активность определяли по способности антиоксидантов, присутствующих в образцах, улавливать радикал DPPH [20].Экстракт добавляли в концентрации 250 мкл г / мл и 100 мкл л DPPH (0,1 мМ). Смесь интенсивно перемешивали и оставляли на 30 мин при комнатной температуре. Затем измеряли оптическую плотность при 517 нм. Бланковый контроль представлял собой 99,5% этанол (Synth, Бразилия), а отрицательный контроль — дистиллированная вода. Активность по поглощению DPPH рассчитывали следующим образом:.

2.5.3. Анализ с восстановительной мощностью

Восстанавливающую способность образцов оценивали по восстановлению феррицианида калия до ферроцианида калия [21].Растительный экстракт с концентрацией 250 мк г / мл добавляли к раствору, содержащему 0,2 М фосфатный буфер (pH 6,6) и феррицианид калия (1%) в конечном объеме 4 мл. Реакцию инкубировали при 50 ° C в течение 20 мин; по истечении этого периода его прекратили добавлением раствора TCA (10%). Затем раствор смешивали с дистиллированной водой и хлоридом железа (0,1%). Поглощение измеряли при 700 нм. Фосфатный буфер использовали в качестве холостого контроля. Результат был выражен в процентах от активности, представленной цифрой 0.1 мг / мл аскорбиновой кислоты (стандарт — Sigma-Aldrich).

2.5.4. Активность по поглощению супероксида

Анализ основан на способности экстрактов ингибировать фотохимическое восстановление нитросинего тетразолия (NBT) в систему рибофлавин-свет-NBT [21, 22]. Для этого экстракт с концентрацией 250 мкМ г / мл был добавлен в 50 мМ фосфатный буфер (pH 7,8), 13 мМ метионин, 100 мМ EDTA, 75 мМ NBT и 2 мМ рибофлавин. После этого раствор подвергали воздействию люминесцентной лампы в течение 10 минут.Изменение цвета на синий связано с образованием формазана, и его отслеживают по поглощению при 560 нм. В спектрофотометре. ЭДТА использовали в качестве контроля, а дистиллированную воду — в качестве холостого опыта. Результаты выражали в процентах поглощения:

2,6. Жизнеспособность клеток — анализ МТТ

Влияние экстрактов C. alnifolia на жизнеспособность клеток оценивали. Использовали одну неопухолевую клеточную линию: NIH / 3T3 (ATCC CRL-1658 — мышиный фибробласт), а также пять линий опухолевых клеток: HeLa (ATCC CCL-2 — клетка аденокарциномы матки человека), SiHa (ATCC HTB-35— клетка плоскоклеточной карциномы человека), PC-3 (ATCC CRL-1435 — клетка аденокарциномы простаты человека), B16-F10 (ATCC CRL-6475 — клетка меланомы кожи мыши) и PANC-1 (ATCC CRL-1469— клетки аденокарциномы поджелудочной железы).Сначала клеточные линии выращивали в культуральных колбах с использованием среды Игла, модифицированной Дульбекко (DMEM), с добавлением FBS (10%) и антибиотиков (100 Ед / мл пенициллина и 100 мкл г / мл стрептомицина). Эти культуральные колбы поддерживали в увлажненной атмосфере с 5% CO ₂ при 37 ° C. Чтобы оценить влияние экстракта на жизнеспособность клеток, клетки переносили в 96-луночные планшеты по количеству клеток на лунку до тех пор, пока они не достигли слияния. Экстракты (HE, CE, EE, ME, WEE и AE) добавляли при 0, 100, 250 или 500 мк г / мл в течение 24 ч при 37 ° C в атмосфере 5% CO ₂.После периода инкубации среду заменяли на 100 мкл л МТТ (1 мг / мл, растворенный в DMEM). Затем клетки инкубировали в течение 4 ч в атмосфере 5% CO ₂ при 37 ° C. Затем лунки отсасывали и кристаллы формазана солюбилизировали добавлением 100 мкл л этанола на лунку [23, 24]. Планшет считывали при поглощении при 570 нм с использованием спектрофотометра для микропланшетов Epoch (BioTek Instruments Inc., Winooski, VT, USA). Жизнеспособность клеток определяли и сравнивали с отрицательным контролем (только DMEM), используя следующую формулу:, в которой соответствовала оптическая плотность экспериментальной группы, а была оптическая плотность отрицательного контроля.

2.7. Антиоксидантная активность in vivo

2.7.1.

Caenorhabditis elegans — Поддержание и лечение

C. elegans N2 (линия дикого типа) был получен из Центра генетики Caenorhabditis (Университет Миннесоты, США) и содержался в среде для выращивания нематод (NGM), засеянной Escherichia coli OP50 при 20 ° C по Бреннеру [25]. Черви синхронизировали с помощью отбеливающего раствора в беременных гермафродитах (NaOCl 1%, NaOH 0.25 M), чтобы иметь животных на стадии L1 (Sulston, Hodgkin, 1988). Для лечения экстракты EE и WEE фильтровали с использованием фильтра 0,22 мкм мкм (Merck) и добавляли к NGM в конечных концентрациях 1 или 10 мг / мл. Синхронизированные L1 культивировали на чашках NGM, содержащих экстракты, и засевали E. coli OP50 в течение 48 часов при 20 ° C, пока они не достигли стадии L4.

2.7.2. Токсичность для

Caenorhabditis elegans Яйца

Для этого анализа 30 яиц помещали в три чашки NGM, содержащие EE и WEE при 0, 1 и 10 мг / мл, и выдерживали при 20 ° C в течение 48 часов.После этого подсчитывали количество L4 и яиц. Этот анализ был проведен в трех независимых анализах с общим количеством 90 яиц на группу.

2.7.3. Анализ окислительного стресса

Анализ окислительного стресса проводили с использованием трет-бутилпероксида водорода (t-BOOH) в качестве продуцента АФК [26, 27]. Сорок червей на стадии L4 обрабатывали EE и WEE в концентрациях 0, 1 и 10 мг / мл в течение 48 часов при 20 ° C. После этого червей переносили в 12-луночный планшет, содержащий буфер M9 с 8 мМ t-BOOH, и оценивали каждые полчаса.Те черви, которые не реагировали на раздражитель, считались мертвыми (без движения). Некоторые черви подвергались цензуре, что означает, что червь не был обнаружен или умер по причинам, не связанным с окислительным стрессом. Эти анализы были выполнены в пяти независимых анализах.

2,8. Тонкослойная хроматография (ТСХ)

Для анализов использовали хроматопланшеты с силикагелем. Используемые подвижные фазы были следующими: (i) этилацетат: муравьиная кислота: вода (8: 0,8: 1,), (ii) этилацетат: муравьиная кислота: метанол: вода (10: 0.5: 0,6: 0,2,) и (iii) толуол: этилацетат: муравьиная кислота (5: 5: 0,5,). Визуализация соединений была достигнута путем распыления растворов серного ванилина, 0,5% натурального реагента А (дифенилборилоксиетиламина), 1% хлорида железа в метаноле и Драгендорфа. Стандарты, использованные при ТСХ, были следующими: кверцетин, урсоловая кислота, галловая кислота, изокверцетин, хлорогеновая кислота, эллаговая кислота, изокверцитрин, лютеонин, канферол, рутин, кофейная кислота, катехин, ориентин, изоориентин, витексин и изовитексин (сигма-айновитексин). ).Затем наблюдали за цветом, измеряли коэффициент удерживания (Rf) пятен и сравнивали его с литературными данными [28]. Для ME и EE была проведена Co-TLC для подтверждения присутствия гликозидных флавоноидов, витексина и изовитексина.

2.9. Высокоэффективная жидкостная хроматография (HPLC-DAD)

WE анализировали с помощью HPLC-DAD (Agilent 1260) с колонкой C18 (Zorbax-). Элюирование проводили градиентом 0,1% уксусной кислоты (A) и ацетонитрила (B) следующим образом: 10% B (0-6 мин), 10-15% B (6-7 мин), 15% B (7 мин.). -22 мин), от 15 до 50% B (22-32 мин), от 50 до 100% B (32-42 мин) и 100% B (42-50 мин) при постоянной скорости потока 1 мл / мин .Образец был приготовлен из расчета 1 мг / мл с использованием метанола (степень чистоты для ВЭЖХ), и объем впрыска составлял 3 мк л. Температура колонки составляла 45 ° C, и детектирование проводили при 228, 254, 280, 290, 320. , 340 и 352 нм. Идентификация фенольных соединений была получена путем сравнения времени удерживания и спектров поглощения в УФ-видимой области со стандартными соединениями.

Стандарты, используемые в HPLC-DAD, были следующими: 3-гидроксикоричная кислота (501-52-0), бензойная кислота (65-85-0), кофейная кислота (331-39-5), коричная кислота 92 ( 621-82-9), хлорогеновая кислота (327-97-9), эллаговая кислота (476-66-4), феруловая кислота (1135-93 24-6), галловая кислота (149-91-7), гентизиновая кислота (490-79-9), о-кумаровая кислота (583-17-5), п-кумаровая кислота (501-98-4), розмариновая кислота (20283-92-5), синаповая кислота (530-59-6 ), апигенин (520-36-5), апиин-апигенин-7- (2-O-апиозилглюкозид) (26544-34-3), кемпферол (520-18-3), кемпферол 3-OD-галактозид (23627- 87-4), 3-O-метилкаемпферол (1592-70-7), биоробин-кемпферол 3-O- β -робинобиозид (17297-56-2), никотифлорин-кемпферол 3-O- β рутинозид ( 17650-84-9), катехин (154-23-4), хризин-5,7-дигидроксифлавон (480-40-0), хризоэриол-3-O-метиллутеолин (491-71-4), даидзеин-4, 7-дигидроксиизофлавон (486-66-8), эпикатехин (490-46-0), генистеин-4,5,7-тригидроксиизофлавон (446-72-0), госсипетин-8-гидроксикверцетин (489-35-0), час эсперидин (520-26-3), гесперитин (520-33-2), гистидулин-6-метоксиапигенин (1447-88-7), гомоориентин-лютеолин 6-C- β -D глюкозид (4261-42-1 ), изорамнетин 3-O- β -галактозид (6743-92-6), изорамнетин 3-O- β -D-глюкозид (5041-82-7), кейозид — изорамнетин 3-O-робинобиозид (107740 -46-5), нарциссин-изорамнетин 3-O- β рутинозид (604-80-8), лютеолин (491-70-3), мирицетин (529-44-2), нарингенин (480-41-1 ), неогесперидин (13241-33-3), ориентин-лютеолин-8-C-глюкозид (28608-75-5), кверцетагетин-7-O-глюкозид (548-75-4), кверцетин (117-39-5) , гиперин-кверцетин 3-O- β -галактозид (482-36-0), изокверцетрин-кверцетин 3-O- β -глюкозид (482-35-9), кверцетин 3-O- β — гентиобиозид (7431-83-6), кверцетин-3-O-робинобиозид (52525-35-6), кверцитрин-кверцетин-3-O-рамнозид (522-12-3), рамнетин (90-19-7), рутин- кверцетин 3-O- β -рутинозид (153-18-4), таксифолин-дигидрокверцетин (480-18-2), тилирозид-ка эмпферол 3-O- (6-O-п-кумароил) глюкозид (20316-62-5) и витексин-апигенин 8-C114 глюкозид (3861-93-4).Другие стандарты соответствуют библиотеке, созданной в лаборатории фитохимии факультета ботаники Университета Сан-Паулу.

2.10. Биоинформатический анализ

С помощью анализов ТСХ было обнаружено присутствие двух гликозидных флавоноидов — витексина и изовитексина в экстрактах листьев C. alnifolia . Эти соединения были использованы для поиска в базе данных системной фармакологии традиционной китайской медицины (TCMSP) для генов-мишеней [29]. Данные, полученные в TCMSP, были использованы в базе данных Kyoto Encyclopedia Genes and Gnome (KEGG) [30].Пути, идентифицированные в KEGG, были перечислены в порядке убывания их стоимости. Эти данные использовались для построения сети с использованием String 10 версии 11 (https://string-db.org/).

2.11. Статистический анализ

Все результаты были выражены как. Каждый анализ проводили в трех или пяти экземплярах, и каждый повторяли не менее 3 раз. Статистический анализ выполняли с использованием GraphPad Prism 6.0 (GraphPad Software Inc., Сан-Диего, Калифорния, США) с использованием вариационного анализа (односторонний дисперсионный анализ) и пост-теста Тьюки для сравнения различных групп.Различия со значениями ≤ 0,05 считались достоверными.

3. Результаты

3.1. Общее содержание сахара, фенольных соединений и белка

Пять экстрактов были получены в последовательности от неполярного к полярному: гексан (HE), хлороформ (CE), этанол (EE), метанол (ME) и водный экстракт (WEE). ), а шестой — только с водно-водной вытяжкой (WE). Таблица 1 показывает, что общее количество фенольных соединений варьировалось от 2,3 мк г / г до 61,26 мк г / г, в порядке HE мк г / г до 225,00 мк г / г, порядок был CE мкг г / г.

**Таблица 1.** Влияние MEC на печень и сыворотку Trolox-эквивалент антиоксидантной способности (TEAC), MDA, CAT и SOD у крыс, отравленных CCL4.
Группа	Печень †
Группа	TEAC	MDA	CAT	SOD
Control	1.00 ± 0,04	1,00 ± 0,04	1,00 ± 0,18	1,00 ± 0,16
CCl ₄	^a 0,65 ± 0,03	^a 2,85 ± 0,15			^a 0,70 ± 0,68
CCl ₄ + Vit E	^b 1,00 ± 0,05	^b 0,98 ± 0,07	^b 1,00 ± 0,18	96 ± 0,13
CCl ₄ + MEC	^b 0,96 ± 0,04	^b 1,00 ± 0,07	^b 1,05 ± 0,13	^b 0,94 ± 0,93
Сыворотка †
TEAC	MDA	CAT	SOD
Контроль 1.0012847	1,00 ± 0,7	1,00 ± 0,16	1,00 ± 0,84
CCl ₄	^a 0,60 ± 0,35	^a 2,26 ± 1,3	29 0,3 ^а 0,60 ± 0,85
CCl ₄ + Vit E	^а 0,87 ± 0,55	^{а, б} 1,23 ± 0,9	^б 0,96 ± 0,39
CCl ₄ + MEC	^b 1,04 ± 0,36	^{a, b} 1,46 ± 0,7	^b 0,95 ± 0,40	^b 0,94 ± 0,11	^b 0,94 ± 0,11


Экстракты	Сахар ( μ г / г)	Фенольные соединения ( μ г / г)	Белки ( μ г)
Гексан (HE)	34.35	2,30	1,4
Хлороформ (CE)	33,45	10,54	1,1
Этанол (EE)	183,81	ME	225,00	61,26	4,5
Отвод воды (WEE)	128.60	33,63	2,8
Отвод воды (WE)	198,56 17.67	2,0

3.2.

In vitro Антиоксидантная активность

Учитывая присутствие фенольных соединений и понимание того, что эти фитохимические вещества могут быть связаны с антиоксидантной активностью, антиоксидантный потенциал каждого из шести экстрактов C. alnifolia был проанализирован с использованием четырех анализов: общая антиоксидантная способность ( TAC), метод свободных радикалов DPPH (2,2-дифенил-1-пикрилгидразилгидрат), тест на снижение мощности и активность по улавливанию супероксида.

Анализ TAC оценивал способность образца отдавать электроны и, таким образом, нейтрализовать реактивные частицы. Самые высокие значения TAC были обнаружены для ME (111,38 EEAq мг) и EE (96 EEAq мг). WEE (58,25 EEAq мг) и WE (59,89 EEAq мг) представили эквивалентные результаты (рисунок 1 (a)). Для анализа DPPH антиоксидантная активность варьировала от 49% до 114% (рис. 1 (b)). Более того, полярные экстракты показали наивысшую активность для анализа восстанавливающей силы, для которого значения варьировались от 83,9% до 105.4% (рисунок 1 (в)). Аналогичный результат наблюдался и для анализа улавливания супероксидных радикалов, где самые высокие значения наблюдались для полярных экстрактов, и эти значения варьировались от 76,4% до 91% (рис. 1 (d)).

Анализ коэффициента Пирсона

показал положительную корреляцию между содержанием фенольных соединений в экстрактах C. alnifolia и антиоксидантными анализами. Наблюдалась сильная корреляция между TAC и анализом восстановительной мощности (см. Табл. 1) и умеренная корреляция с улавливанием супероксидных радикалов.Кроме того, содержание сахара показало очень сильную корреляцию для анализа снижения мощности и TAC и умеренную корреляцию с улавливанием супероксидных радикалов (см. Таблицу 1).

3.3.

In vivo Analysis

Данные описанных выше антиоксидантных анализов побудили нас провести антиоксидантные анализы in vivo . Однако перед проведением этих анализов необходимо было оценить токсический потенциал этих экстрактов, чтобы исключить возможное вредное воздействие на животных, использованных в экспериментах in vivo .Затем были проанализированы их эффекты на неопухолевые клетки 3T3 и пять линий опухолевых клеток, HeLa, SiHa, PC-3, B16-F10 и PANC-1. После этого Caenorhabditis elegans использовали в качестве модели in vivo .

3.3.1. Жизнеспособность клеток

Для клеточных линий было оценено влияние шести экстрактов на три концентрации (100 мк г / мл, 250 мк г / мл и 500 мк г / мл) (Рисунок 1) . Эти экстракты не влияли на жизнеспособность клеток ни при одной из трех проанализированных концентраций.Однако для ME и WEE наблюдалось снижение жизнеспособности неопухолевых клеток примерно на 25-35% (ME при 250 или 500 μ г / мл и для WEE при 500 μ г / мл) ( Таблица 2). Кроме того, для линий опухолевых клеток в целом не было значительного изменения жизнеспособности клеток. Снижение жизнеспособности клеток на 10-25% для HE, CE и WE наблюдалось для клеточных линий HeLa и SiHa (таблица 2). Таким образом, в целом для неопухолевых и опухолевых клеточных линий экстракты C. alnifolia не были цитотоксичными по отношению к модели клеточной линии in vivo.

00000 н. 0000393179 00000 н. 0000483850 00000 н. 0000485620 00000 н. 0000002464 00000 н. 0000002116 00000 п. трейлер ] / Назад 589884 / XRefStm 2464 >> startxref 0 %% EOF 649 0 объект > поток hb«g` \.1Ф!%
Архив кадастровых планов территорий, файлы угрн. Веб-сервисы для кадастровых инженеров «Полигон Кадастровая выписка земельных участков
».
Программа XML Converter предназначен для преобразования XML-файлов (XML-документов) с использованием одного из стандартных существующих инструментов преобразования XML-файлов — технологии запросов XQuery. В этом случае преобразование может производиться сразу несколькими файлами подряд. Помимо самого преобразования, программа имеет функцию объединения преобразованных файлов и переименования исходных файлов и файлов окончательного преобразования на основе информации, содержащейся в самих файлах.Функция переименования позволяет получить содержательные имена для обрабатываемых файлов, например, номер кадастрового квартала для файлов CBT. Программа имеет гибкую систему настройки и имеет множество преимуществ.
Хотя программа XML Converter может конвертировать любые файлы XML, в настоящее время она в первую очередь предназначена кадастровым инженерам , и направлена на преобразование XML файлов / документов Росреестра, органов кадастрового учета — кадастровых выписок и кадастровых планов территории (КПП).Это достигается за счет наличия в стандартном комплекте поставки набора XQuery-запросов, предназначенных для преобразования XML-файлов Росреестра в другие распространенные текстовые форматы обмена, включая MIF / MID, DXF, CSV, TXT, HTML и др.
Тем не менее, при необходимости трансформации набора похожих XML-файлов из другой области, потенциальные пользователи программы могут обратиться к автору для проработки вопроса разработки специальных запросов на конвертацию таких файлов.
с использованием стандартной технологии преобразования XQuery XML
простота использования и высокая скорость работы
возможность пакетного преобразования нескольких файлов одновременно
возможность объединения результатов преобразования в отдельные файлы (например, для XML-файлов Росреестра объединить результаты преобразования нескольких операторов в один пакет файлов MIF / MID и, как следствие, получить единую таблицу в MapInfo)
возможность переименования XML-файлов на основе информации, содержащейся в самих файлах (например, для XML-файлов Росреестра с произвольным названием переименование происходит по кадастровому номеру квартала / участка и дате выдачи выписки)
В комплекте с программой есть запросы на конвертацию в наиболее часто используемые текстовые форматы MIF / MID, DXF, CSV, TXT, HTML
форма итоговой табличной информации стандартных запросов максимально приближена к традиционно используемой табличной форме обыкновенного бумажного документа кадастрового плана территорий (КПП)
возможность извлечения дополнительной информации, не вошедшей в бумажный аналог документа (например, , извлечение всех координат участков внутри блока из последней версии CBT )
возможность настройки формы и форматов получаемых файлов путем редактирования запросов на преобразование; заявки подаются в открытой форме
небольшой размер установщика, простота установки
не требует установки дополнительных библиотек — все необходимые библиотеки уже включены в установщик
возможность подключения внешних обработчиков запросов XQuery, что может обеспечить значительное повышение производительности обработки больших файлов
Вместе с программой поставляются запросы на преобразование XML-файлов Росреестра, таких как выписки и CBT, в следующие распространенные форматы: MIF / MID, DXF, CSV, TXT, HTML.
Формат MIF / MID — это формат обмена ГИС MapInfo, благодаря своей простоте получил широкое распространение и де-факто является форматом обмена для кадастровых работ и широко используется кадастровыми инженерами в своей деятельности.
Формат DXF — это формат обмена автоматизированной графической программы AutoCAD, широко используемый для обмена графической информацией, связанной с черчением, дизайном, картографией.

Файлы в формате DXF можно легко и без потерь открывать или импортировать в Microstation.

Формат CSV — текстовый формат для представления табличных данных. Легко понимается любой программой для работы с электронными таблицами, например Excel. Использует разделитель точек с запятой для полей (столбцов).

Формат TXT — аналогичен формату CSV, но использует табуляцию в качестве разделителя. Благодаря этому информация, содержащаяся в этих файлах, легко воспринимается в текстовом редакторе … Кроме того, существует специальный запрос на преобразование в формат TXT, который извлекает номера точек с их координатами в формате NXY.

Формат HTML — формат, используемый для представления страниц в Интернете. Это удобно из-за визуального представления и того факта, что Интернет-браузер, способный его просматривать, доступен на каждом компьютере.
Информация, выбранная из исходного XML-документа для части, представляющей данные для всех форматов, идентична и максимально приближена к содержанию, представленному в таблице бумажного CBT, а именно
КН — кадастровый номер участка полностью
ЕЗ — кадастровый номер единого землепользования, если участок входит в него
Address — место нахождения (адрес) сайта
Категория — категория земли — номер, как в СВТ
Использование — Разрешенное использование
Площадь — площадь в квадратных метрах с округлением до 1 кв.М.
Точность — Точность без округления
Area_code — тип области (008 — Заявленная, 009 — Скорректированная)
Стоимость — кадастровая стоимость в тыс. Руб.
Права — вид имущественных прав, если их несколько, то перечисляются через запятую
Обременения — обременения, если их несколько, перечислены через запятую
Дата — дата создания сайта, т.е. его регистрация
Статус — статус участка в кадастре (01 — Ранее зарегистрированный, 05 — Сертифицированный, 06 — Зарегистрированный, т.е. временные участки имеют статус 05 — сертифицированы, но не зарегистрированы)
Новое в версии 1.8.0
Добавлена возможность исправления исходных XML-файлов выписок и CBT для некоторых случаев, когда эти файлы некорректны (получены в таком виде из Росреестра). К таким случаям относятся использование некорректных тегов для координат (вместо и вместо), использование необъявленных префиксов (например, adrOut :). Для исправленных файлов копии исходных файлов создаются с суффиксом –copy.
Добавлена возможность проверять и удалять дубликаты в объединенном файле. Как правило, при объединении CBT в соседние кварталы данные CBT имеют много общих зон и границ, которые дублируются в объединенном файле. Новая функция позволяет вам удалить повторяющиеся зоны и границы в этом случае, оставив только одну копию каждой зоны и границы.
В запросах на извлечение графических данных ранее единственный слой зон разделен на два отдельных слоя: территориальные зоны и зоны с особыми условиями использования территории (ZOUIT).Соответственно, для формата MIF / MID были сделаны два отдельных запроса: территориальные зоны и зоны ZOUIT, которые после преобразования дают два отдельных слоя с суффиксами _terzone и _zouit. Для формата DXF запросы были исправлены так, что вместо одного слоя GKN_ZONE в сгенерированных файлах DXF стали создаваться два отдельных слоя: GKN_TERZONE и GKN_ZOUIT.
Введен более строгий контроль за версией программы. В диалоговом окне «О программе» теперь всегда отображается номер текущей версии с учетом изменений в ресурсах.
Новое в версии 1.7.5
Добавлен запрос, позволяющий извлекать точки участков с их обозначением и точностью в виде точечных объектов в формате MIF / MID из экстрактов и QPT формата 2017.
Некоторые запросы для формата 2017 были немного улучшены.
Новое в версии 1.7.4
Разработаны Заявки на преобразование ведомостей ЕГРН и кадастровых планов территории (КПП), представленных в новом, еще не утвержденном формате, введение которых связано с переходом на новый закон 218-ФЗ «О государственной регистрации». недвижимости ».В набор запросов входят преобразования в графические форматы MIF / MID, DXF и текстовые CSV, TXT. Этот формат уже используется в Красноярском крае.
В связи с тем, что уже произошло третье существенное изменение формата предоставляемых кадастровых данных для групп запросов, обработка различных форматов добавила год в заголовке, когда этот формат начал применяться.
Новое в версии 1.7.3
В связи с тем, что Единый государственный реестр недвижимого имущества (ЕСРН), несмотря на название, до сих пор не унифицирован и содержит информацию из Государственного кадастра недвижимого имущества (ГКН) и информацию из Государственного реестра прав (ГРП) отдельно , выписка ЕГРН 2017 г. на земельные участки и объекты недвижимости стала содержать два раздела информации о правах.Первый, как и прежде, содержит информацию Госкомимущества, второй новый раздел содержит информацию о гидроразрыве пласта. Информация из этих разделов может отличаться. В программу добавлены запросы, которые в табличной форме (форматы CSV и TXT) извлекают характеристики участков и объектов недвижимости, а права и обременения в них извлекаются дважды: отдельно Госкомимуществом и Госкомрегистрацией. Офис.
Новое в версии 1.7,2
Улучшены универсальные запросы преобразования в формат DXF в части восстановления круговых объектов (создаются объекты CIRCLE, а все остальные — POLYLINE) и улучшено преобразование файлов XML планов границ.
Улучшены универсальные запросы преобразования в формат MIF / MID в части лучшего преобразования XML-файлов межевых планов. (Извлечение круглых объектов для этого формата было реализовано ранее. В этом случае такие объекты конвертируются в восьмиугольники).
Новое в версии 1.7.1
Добавлены новые пул-запросы в табличной форме с подробными характеристиками земельных участков и недвижимости. Для участков и объектов недвижимости созданы отдельные запросы на преобразование, и каждый из них в двух редакциях (всего 4 запроса): преобразование в формат CSV (разделитель точка с запятой) и преобразование в формат TXT (разделитель табуляции). Таблицы содержат заголовки, а информация объединяется в единую таблицу (файл CSV / TXT). Исходными файлами для конвертации являются XML-файлы кадастровых выписок, паспортов, СРТ, созданные по новым версиям соответствующих XML-схем.Сформированное табличное представление удобно для анализа информации о земельных участках и объектах недвижимости, содержащейся в кадастровых выписках, паспортах, ТОС.
Новое в версии 1.7.0
Повышена стабильность внутреннего процессора запросов XQuery. Внутренний обработчик теперь может обрабатывать файлы XML большего размера. (Перед преобразованием файлов XML большого размера внутренний обработчик мог привести к сбою и аварийному закрытию программы)
Используется более надежным способом передачи исходных файлов XML в запрос для обработки с использованием внутреннего обработчика.(Раньше обработка файла могла не запускаться, если в имени файла или пути к нему был символ решетки # или если в сетевом пути компьютер был назван на русском языке)
Выбранное преобразование и обработчик запросов сохраняются между запусками программы
Добавлены два новых запроса (каждый в 2 редакциях XY и YX) на преобразование XML-файлов кадастровых выписок и CPT, а также других XML-файлов Росреестра, созданных по новым XML-схемам (например, план карты, кадастровый паспорта ОКС и др.) в формат DXF с расположением объектов по слоям (в названии используется DXF LAYER BY LAYER) и выделением объектов разными цветами (см. цвета в Новом для версии 1.6.6), установленными для слоев. Первый запрос «вытягивает» только графику из XML, второй также информацию, которая записывается в атрибуты блока. Используются следующие названия слоев:
GKN_SLOCATIONS — для участков, их контуры
GKN_PARTS — на части участков (обременения)
ГКН_КВАРТАЛЫ — для кадастровых кварталов
GKN_BOUNDARIES — для границ НП и МО
GKN_ZONES — для охранных и территориальных зон
ГКНІНЕМОВЕЖИМОСТЬ — для зданий, сооружений, ОНС
Доработана функция объединения файлов, полученных в результате конвертации, в один файл.Более сложные файлы, такие как файлы DXF, теперь также объединяются с помощью блоков и атрибутов. Те. функция слияния теперь работает для всех целевых форматов. Также правильнее объединять файлы, если среди них есть пустые файлы без объектов. (Ранее пустой файл приводил к дополнительному разрыву строки в объединенном файле, что было критично для некоторых форматов и могло приводить к ошибке)
Добавлен запрос на преобразование выписок USRR в формат CSV. Преобразуя набор операторов USRR с помощью этого запроса и комбинируя результат, вы можете получить данные этих операторов в табличной форме, которая удобна для анализа, если вы откроете полученный комбинированный файл в одной из программ, например Excel или Расчет
Новое в версии 1.6,6
Добавлена подсветка при преобразовании в графические форматы MIF / MID и DXF различных типов объектов, найденных в CBT и экстрактах, в разных цветах. Используются следующие цвета:
фиолетовый — для земельных участков и участков
малиновый — для кадастровых кварталов
зеленый — для охранных и территориальных зон
красный — для границ населенных пунктов и городских границ
оранжевый — на недвижимость
Новое в версии 1.6,5
Добавлен отдельный запрос для конвертации объектов недвижимости, т.е. извлечения их контуров и характеристик в формат MIF / MID из CPT
Исправлена обработка открытых контуров (линейных структур) в универсальных запросах преобразования в форматы MIF / MID и DXF
Переработаны запросы на преобразование CBT в текстовые форматы для обработки новых версий XML-схем
Новое в версии 1.6.4
Доработаны все запросы на преобразование XML-файлов кадастровых выписок, кадастровых паспортов участков и объектов недвижимости, кадастровых планов территорий, созданных по новым XML-схемам, вступившим в силу 31.12.2014.
Новое в версии 1.6.3
Переработаны универсальные запросы на преобразование в форматы DXF и MIF / MID XML-файлов кадастровых выписок, кадастровых паспортов участков и недвижимости, кадастровых планов территории, созданных по новым XML-схемам, вступившим в силу 31 декабря. , 2014.
ВАЖНО! В связи с тем, что изменения в новых схемах XML довольно значительны, невозможно сделать так, чтобы один запрос мог обрабатываться как файлы, созданные по схемам новой версии, и по старой.Запросы, обрабатывающие файлы, созданные в соответствии с новыми версиями схем XML, имеют префикс NEW в своих именах.
Новое в версии 1.6.2
Добавлены запросы для извлечения элементов OMC из CPT в формат MIF / MID и формат TXT с разделителем табуляции.
Новое в версии 1.6.1
Добавлена возможность получать презентацию для печати в формате XML файла XML, используя преобразование XSLT, указанное в файле XML, т.е.е. получение обычной печатной формы выписок, КПТ, паспортов по их электронным аналогам в формате XML. Преобразования выполняются внешними механизмами преобразования XSLT. Поддерживает два внешних обработчика MSXLS 4.0 (входит в состав установщика) и Saxon-HE 9.5 (устанавливается отдельно). Для выполнения преобразований XSLT требуется подключение к Интернету.
Новое в версии 1.6.0
Добавлена возможность использования внешних обработчиков запросов, что позволяет преобразовывать большие XML-файлы, достигающие сотен мегабайт.Вы можете скачать дополнительные внешние обработчики запросов так же, как и саму программу в разделе «Скачать».
Поддержка перетаскивания и добавлена команда для операционной системы списка исходных файлов Открыть с помощью, т.е. добавить исходные файлы для преобразования из проводника или файлового менеджера, вы можете просто перетащить их в список или вызвать команду Открыть с помощью.
Новое в версии 1.5.3
Более корректная обработка частей земельных участков и землепользования для XML-файлов выписок и CBT, созданных по новым версиям XML-схем.
Для универсальных запросов добавлена поддержка обработки XML-файлов ориентиров, созданных по новой 4-й версии XML-схемы.
Добавлен запрос на извлечение формализованного адреса участков из КПТ и извлечения, т.е. разложение на компоненты, а также извлечение кодов КЛАДР и ОКАТО.
Новое в версии 1.5.2
Доработаны запросы на преобразование с целью более корректной обработки XML-файлов Росреестра, таких как экстракты и CBT, созданные по новым версиям XML-схем — 5-я для экстрактов и 8-я для CBT.При доработке совместимость в старых версиях сохраняется. В новых версиях учтены следующие особенности:
Первая точка контура теперь дублируется в конце описания пространственной составляющей для замкнутых контуров
Изменено имя или расположение некоторых элементов в схеме XML, таких как площадь и кадастровая стоимость.
В связи с тем, что новая 8-я версия CBT теперь может содержать координаты и характеристики кварталов, зон с особыми условиями использования и территориальных зон, границ населенных пунктов и муниципальных образований, специальные запросы для извлечения данных об объектах и их характеристик в Создан формат MIF / MID.Универсальные запросы, ориентированные на извлечение пространственной составляющей из любых XML-файлов Росреестра, обрабатывают эти объекты достаточно корректно.
Новое в версии 1.5.1
Пересмотрены и уточнены запросы на преобразование операторов и CBT в формат MIF / MID, добавлены два новых поля Owners и Tenants (в CBT такой информации нет), в поле Tenants также есть лица и организации, в пользу которых установлены обременения.
Значительно улучшены универсальные запросы на преобразование в формат MIF / MID. Теперь после преобразования эти запросы получают ту же структуру таблицы MapInfo, что и обычные запросы, при этом вся информация, которая была извлечена с помощью обычных запросов, также извлекается не только из экстрактов и CBT, но и из файлов XML с ориентирами, техническими планами и т. Д. ( при условии, конечно, что она есть)
Осуществлено упорядочение запросов в списке доступных для конвертации запросов и четкое разделение их на «обычные», то есть конвертирующие только экстракты и CBT и «универсальные», то есть те, которые не извлекают информацию. только из выписок и ТОС, но из других XML-файлов Росреестра — ориентиров, технических планов и т. д.Теперь запросы преобразования в формат MIF / MID доступны в двух версиях, запросы преобразования в формат DXF без поддержки блоков и атрибутов являются универсальными, запросы преобразования в формат DXF с поддержкой блоков и атрибутов являются общими, все запросы преобразования в табличные форматы (CSV , HTML, TXT) нормальные.
Во все запросы добавлена «защита» от появления разрывов строк в строках (например, таких как Разрешенное использование, Адрес и т.д.) (их там не должно быть, но они почему-то иногда есть), внешний вид из которых приводили либо к неправильной синхронизации (несогласованности) данных и графики для файлов, полученных после преобразования в формат MIF / MID, либо к ошибке при открытии файлов DXF.
Во всех запросах оптимизирована и улучшена функция восстановления полного адреса, которая используется для восстановления полного неформализованного адреса из компонентов, если адрес не указан в данной форме (поле Примечание не указано). Добавлен справочник регионов, поэтому восстановленный адрес теперь всегда будет начинаться с названия региона.
Отличия «обычных» запросов от «универсальных»:
Обычные запросы конвертируют только операторы и CBT, универсальные запросы могут конвертировать любые XML-файлы Росреестра, содержащие графику (координаты объекта).
Для обычных запросов привязка обработки XML идет к участкам (узел Parcel), в универсальной привязке обработки XML идет к пространственным данным (узел Entity_Spatial), т.е. если на сайте нет пространственного компонента (декларативный сайт), универсальный запрос не будет «Замечаем» и обрабатываем такой сайт.
Поскольку универсальный запрос на преобразование в формат MIF / MID не обрабатывает декларативные разделы, записи для объектов без графики не создаются в таблицах MapInfo (предложение None в файле MIF).Это можно использовать, например, для таких программ, которые при импорте файлов в формате обмена MIF / MID не понимают или неправильно обрабатывают объекты без графики (например, Digitals).
Благодаря возможности извлекать данные из любых XML-файлов Росреестра, универсальные запросы могут использоваться не только для преобразования информации, полученной из инвентаризации, но также для извлечения и контроля информации, введенной в XML-файлы, предназначенные для передачи в инвентаризацию, например , в виде электронных версий достопримечательностей., технические планы, карты (план).
Новое в версии 1.5.0
Изменен механизм хранения настроек программы и использованных запросов по аналогии с программами XML Constructor и XML Reports. Теперь настройки хранятся в XML-файле вместо INI. Запросы хранятся в отдельной папке ресурсов, указанной при установке программы.
Изменена система регистрации программы, сделанная по аналогии с программами XML Constructor и XML Reports.
Изменен механизм демонстрационного режима — теперь программа работает без ограничений 30 дней, после чего перестает работать, если нет регистрации.
Список запросов расширен двумя новыми универсальными запросами преобразования для MIF и DXF. В отличие от других запросов, связанных со структурой XML-файлов для экстрактов и CBT, эти запросы могут извлекать графику из любых XML-файлов Rossreetr, включая экстракты, CBT, планы границ, технические планы, карту (план) и т. Д.Атрибутивная информация различных объектов, извлекаемых с помощью этих запросов (существующие и сгенерированные сайты, контуры и части сайта, здания, зоны и т. д.), существенно различается, то в этом случае извлекается только обозначение объекта. Использование данных запросов позволяет:
Контролировать наполнение каталогов для сформированных межевых и технических планов, карт (планов)
восстановление графики из файлов XML в случае утери исходных материалов
Что нового в версии 1.4,2
Обновлен запрос XQuery для преобразования файлов XML в формат MIF / MID в связи с изменениями в схемах XML относительно многоконтурных сечений — многоконтурные сечения теперь передаются отдельными объектами, для каждого контура пишется свое обозначение, например: 123 (1) (запрос предыдущей версии не передавал многоконтурные участки для экстрактов и CBT, созданных по новым схемам).
Обновлен XQuery-запрос для преобразования файлов XML в формат DXF (без атрибутов, блоков) — контуры многоконтурных участков теперь подписаны (предыдущая версия запроса передавала контуры многоконтурных участков, но не проставляла подписи).
Что нового в версии 1.4.1
Обновлен запрос XQuery для преобразования файлов XML в формат MIF / MID — добавлен еще один столбец для создания подписей в MapInfo, содержащий только обозначение номера участка (или его части) без кадастрового номера квартала в той же форме, в которой они указывается в CPT и должен отображаться на чертеже плана границ.
Обновлен XQuery-запрос для преобразования файлов XML в формат DXF (без атрибутов, блоков) — текстовые подписи размещаются в центре основного (первого) контура объектов с условным обозначением номера раздела (или части) в том же форма, в которой они указаны в CBT и должны отображаться на чертеже плана границ.
Обновлены все запросы DXF: после преобразования и открытия преобразованного файла в AutoCAD или MicroStation в текущем виде отображались преобразованные участки.
Все запросы XQuery, которые извлекают данные, были обновлены с точки зрения обработки случая, когда может быть несколько записей с разрешенным использованием — каждое разрешенное использование теперь отображается через запятую (аналогично обработке прав и обременений).
Оптимизирован запрос XQuery для выбора точек объектов в формате NXY и добавлена его расширенная версия, которая выбирает, помимо числа, координат, точности, метод фиксации (код для ссылки, см. XML -схема).
Новое в версии 1.4.0
Изменена процедура перехода с демонстрационной версии на полную версию программы — теперь все, что вам нужно сделать, это ввести свой личный серийный номер.
Добавлена функция переименования как целевых, так и исходных документов на основе информации, содержащейся в преобразованных файлах XML.
Обновлен XQuery-запрос для преобразования файлов XML в формат MIF / MID с точки зрения обработки общих землепользований и частей земельных участков (теперь входящие участки отдельных землепользований преобразуются в ту же форму, что и при преобразовании QPT, т.е.е. отдельными контурами, а не объединенными в многоконтурную посылку, как это было раньше; части земельных участков также создаются как отдельные контуры, с их информацией — ранее не создавались).
Изменен алгоритм определения пределов для форматов MIF / MID, DXF (ранее наличие участков с ошибочными координатами могло приводить к установке таких пределов, чтобы участки не попадали в рабочее поле и пропадали при открытии преобразованные файлы в ГИС).
Это полезные механизмы, например, для преобразования информации в другой формат, в другую схему XML, проверки схем, просмотра графики и т. Д.
Каждая служба выполняет свою собственную небольшую задачу и в настоящее время не может претендовать на роль серьезной программы. Однако веб-сервисы выходят за рамки предлагаемых программ серии Polygon и расширяют свои возможности.
Услуги на нашем сайте будут развиваться, предлагая вам больше возможностей. В настоящее время доступны услуги:
Конвертер кадастрового плана территории из версии 09 в версию 08
Конвертер кадастрового плана территории из файла XML 2015 версии 09 в предыдущий формат схемы XML версии 08.С помощью этого конвертера вы можете импортировать CBT в программы, не поддерживающие новый формат файла XML 2015 года.
Конвертер кадастровой выписки земельного участка версии 06 в версию 05
Конвертер кадастровой ведомости земельного участка из файла XML 2015 года версии 06 в предыдущий формат схемы XML версии 05. С помощью этого конвертера вы можете импортировать оператор в программы, которые не поддерживают новый формат файла XML 2015 года.
Просмотр чертежей кадастровых файлов XML + редактор гео
Просмотр чертежи любых XML-файлов, полученных из Росреестра и представленных в Росреестр: кадастровый план территории, кадастровые выписки и паспорта земельных участков и АСУ, ориентиры, технические планы, зоны, границы субъектов, муниципальных образований и поселений и др.Создание общедоступной кадастровой карты … Географический редактор: создание площадных и линейных объектов, получение и копирование координат.
Печать XML-файлов выписок, паспортов, ТО
Получили выписку из Росреестра, но не знаете, как ее распечатать? Скачать XML-файл и распечатать его … Сервис предназначен для печати XML-файлов, поступивших в Росреестр: кадастровых выписок и паспортов земельных участков, кадастровых планов территории, выписок и паспортов объектов капитального строительства.
Конвертер кадастровых XML в MIF / MID (MapInfo)
Конвертер кадастровых XML-файлов в MIF / MID-формат. Координаты земельных участков, контуров, частей, ОКС, кадастровых кварталов, зон, субъектов, муниципальных образований и населенных пунктов извлекаются в файл MIF. В MID-файл: кадастровый номер, площадь, тип объекта (участок, часть, квартал и т. Д.).
Преобразователь кадастрового XML в DXF (AutoCAD)
Преобразование файлов кадастрового XML в формат DXF (формат AutoCAD). Конвертируются координаты земельных участков, контуров, частей, АСУ, кадастровых кварталов, зон, субъектов, муниципальных образований и населенных пунктов.Также отображаются подписи объектов и точек.
Конвертер кадастрового плана территории версии 08
Конвертер кадастрового плана территории версии 08 XML-схемы в табличный формат. Извлекаются координаты кадастровых кварталов, территориальных зон и зон с особыми условиями использования территории, субъектов, муниципальных образований и поселений. Координаты можно скопировать в любую программу.
Конвертер кадастрового плана территории из версии 08 в версию 07
Конвертер кадастрового плана территории из XML-файла, выполненного по XML-схеме версии 08, в предыдущий формат по версии XML-схемы 07.В старом формате отсутствовали координаты кадастрового квартала, зон и границ субъектов. Результатом работы службы является ссылка для загрузки файла XML.
Конвертер выписки земельного участка из версии 05 в версию 04
Конвертер выписки земельного участка из XML-файла, составленного по XML-схеме версии 05, в предыдущий формат по XML-схеме версия 04. Результатом работы сервиса является ссылка на скачивание XML-файла.
Кадастровая выписка земельного участка из кадастрового плана территории
Получить кадастровую выписку земельного участка из XML-файла кадастрового плана территории.Выберите XML-файл, укажите кадастровый номер земельного участка и скачайте XML-файл выписки. Выписку можно сразу распечатать.
Кадастровая выписка по земельному участку
Получить кадастровую выписку по любому земельному участку из базы данных Росреестра: мгновенно, бесплатно, актуально. Введите кадастровый номер земельного участка и скачайте XML-файл экспресс-выписки. Выписку можно сразу распечатать.
Кадастровый паспорт OKS
Получите кадастровый паспорт любого объекта капитального строительства (здания, сооружения, помещения) из базы данных Росреестра: мгновенно, бесплатно, в актуальном состоянии.Введите кадастровый номер и скачайте файл паспорта в формате XML. Полученный файл можно сразу распечатать.
Проверка ZIP-архивов на полноту и соответствие требованиям Росреестра
Здесь вы можете проверить полноту ZIP-архива и его соответствие требованиям Росреестра. Например, все необходимые файлы прикреплены к XML-файлу и подписаны. Сделайте это перед отправкой ZIP-архива в Росреестр, чтобы убедиться в отсутствии ошибок в архиве.Загрузите файл архива, и результаты сканирования будут немедленно отображены.
Hide Drawing Builder. Руководство пользователя
Скачайте файлы с кадастровым планом территории (CPT), кадастровой выпиской (CV), землеустроительным планом (MP) и техническим планом (TP) и получите проект.
Эти файлы получены из Росреестра, имеют расширение XML, как правило, находятся в архивах ZIP. Вы можете поместить все доступные файлы XML и ZIP в одну папку и скачать их одним архивом. Более того, нет необходимости отделять ТОС от кадастровых выписок, ориентиров и прочего.Также с этими файлами можно скачать архивы RAR и ZIP. Помимо XML, архивы могут содержать файлы с цифровой подписью, другие файлы, прикрепленные архивы. На выходе будет чертеж с расширением DXF, содержащий данные из выбранных файлов — он открывается в AutoCAD (версии 2010 и выше), а также в большом количестве программного обеспечения с открытым исходным кодом для любых платформ (включая мобильные). Вы также получите отчет об открытии в Excel (версия 2007 и выше) с расширением XLSX.
Инструкции:
1. Выберите необходимые файлы на вашем компьютере и расширение: XML, ZIP, RAR
2. Обычно системы координат, используемые для описания объектов недвижимости, имеют ось X на север и ось Y на на востоке, поскольку большинство приложений САПР имеют обычную горизонтальную ось X (которая соответствует востоку) и вертикальную ось Y (которая соответствует северу), для визуального отображения чертежа установите флажок «Поменять местами X и Y координаты «.
3. Нажмите «Создать чертеж и отчет» и дождитесь завершения.
4. Когда все будет готово на 100% — появятся 2 ссылки для загрузки результата — «загрузить dxf», «загрузить xlsx» — щелкните по ним и загрузите файлы на свой компьютер.
Слои в чертеже DXF:
На чертеже будут отображаться данные из всех типов файлов XML с собственной группой слоев для каждого типа:
1. для файлов KPT — такие слои, как KPT_Contour, KPT_CadastralNumber, то есть с префиксом KPT
2 .для файлов KB — слои с префиксом KV_
3. для файлов MP — слои с префиксом MP_
4.для файлов TP — слои с префиксом TP_
Кроме того, каждое свойство файла KPT выделяется на отдельном слое, поэтому слой KPT_Contour содержит контур графика, а слой KPT_CadastralNumber содержит текстовую метку с кадастровым номером. В свою очередь, слой TP_Contour содержит контур здания / сооружения. В тексте русские буквы пишутся английскими буквами.
Прежде всего, вы увидите контуры, а уже внутри каждого контура будет блок текста.
Другие уровни перечислены ниже:
KPT_OMS — Точка OMC
KPT_Area — Площадь и неопределенность
KPT_Location — Местоположение
KPT_State — Статус объекта
KPT_RightsTightsTrances_Subnews_Response
Разрешение на использование KP11 — Разрешение на использование
— Разрешение на использование 911c — Разрешение на использование 911c — Разрешение на использование 911c — Разрешение на использование 911 -Parcel Constraints
KPT_Category — Категория PKT
KPT_DeltaGeopoint — Точечная ошибка (около каждой точки контура)
KPT_CategoryShtrih — Штриховка в зависимости от категории
KPT_Kvartali — Кварталы
KPT_Zones
Границы KPT_Zones — Структура зон_KPT_Zones Страниц в отчете XLSX: 1.Объекты KPT — Список объектов из всех файлов KPT с кадастровым номером и другими свойствами, такими как площадь, категория
2. Объекты KV — Список объектов из всех файлов KV
3. Объекты MP — Список объектов из всех файлов MP
4. TP Объекты — список объектов из всех файлов TP.
5. Ошибки площади — список несоответствий между расчетной площадью участков и площадью, указанной в XML
6. Площадь по категориям — показывает, сколько площади приходится на каждую категорию земель
7. Область по использованию — показывает, какая область предназначена для каждого разрешенного использования
В случае неисправности напишите на электронную почту
Для конвертации xml-отчетов Росреестра в MapInfo существует бесплатная утилита (xml-конвертер) для выгрузки в таблицы выписок или кадастровых планов, которые можно скачать со страницы.
Подключение конвертера данных из XML-схем Росреестра к MapInfo
Для подключения данной утилиты необходимо поместить все файлы, представленные в архиве, в папку Tools, обычно расположенную на диске C: Program FilesMapInfoProfessionalTools. Обратите внимание, что для работы данной операции и работы утилиты необходимы права администратора. Затем запустите MapInfo и в меню «Программы / Каталог программ …» нажмите кнопку «Добавить». В поле «Местоположение» найдите и выберите утилиту «ImportMI» в папке «Инструменты», а затем нажмите «Открыть».После этого в строке «Заголовок» укажите свое имя для этой утилиты и нажмите кнопку «ОК». Далее рекомендуется установить флажок «Запуск» рядом с названием указанной вами утилиты и нажать кнопку «ОК». Теперь эта утилита под названием «XML Converter» будет находиться в меню «Программы».
Импорт данных из xml-выписки Росреестра
Запустив конвертер через меню «Программы / Конвертер данных из XML-схем Росреестра» в окне настроек импорта, в первую очередь, выберите папку, в которую будут помещены результаты конвертации. будут сохранены при нажатии на кнопку «Папка».Далее подключаем преобразованный xml файл кадастрового плана территории (КПП) или кадастровую выписку земельного участка (КВЗУ), нажав на кнопку «XML файл». С помощью кнопки «Стили» вы можете дополнительно настроить стили слоя относительно стандартных. Номера точек при отсутствии xml-элемента Num_Geopoint следует выбирать из списка Su_Nmb элемента. При необходимости вы можете поменять местами координаты, установив соответствующий флажок.
Нажав кнопку «Дополнительно», вы можете выбрать групповую обработку файлов и одновременно настроить тип преобразования с очисткой или обновлением таблиц в папке для преобразованных данных.Конверсия запускается нажатием на кнопку «Конвертировать».
При установке флажка «Сгенерировать выходные данные таблицы в схеме-плане с экстремумами из файла XML» независимо от выбранной системы координат, нажав кнопку «Проекция», данные в таблицах MapInfo будут в схеме-плане. Чтобы задать параметры локальной системы координат, необходимо отключить указанную выше опцию, сняв флажок. Нажмите кнопку «Проекция», чтобы выбрать соответствующую проекцию из MAPINFOW.PRJ файл. Но, как правило, параметры локальной системы координат в этом файле отсутствуют.
Установка локальной системы координат в MapInfo
Необходимость установки параметров локальной системы координат существует в случаях, когда необходимо использовать информацию из разных источников с разными системами координат. Для этого необходимо зарегистрировать параметры локальной системы координат в каталоге систем координат MAPINFOW.PRJ. Открываем этот файл в простом блокноте и вводим параметры локальной системы в следующем подобии в конце документа, опуская одну строку:
«- Локальная система координат -»
«MSK-12 Zone 1», 8, 1001, 7, 47.55, 0, 1, 1250000, -53.504
«МСК-12 Зона 2», 8, 1001, 7, 50.55, 0, 1, 2250000, -53.504
Следует отметить, что в этом случае первая линия указывает на группу систем координат, называемую локальной системой координат. Во второй и третьей строках указаны параметры «МСК-12 зона 1» и «МСК-12 зона 2». Эти параметры являются расчетными и приблизительными, и взяты из статьи MCK-12 Республика Марий Эл Параметры для mapinfow.prj.
Пример отображения данных
В качестве примера импорта xml-выписки из Росреестра возьмем КПТ, рассмотренную в статье «Кадастровый план территории».Также в нем есть ссылки на разные способы импорта xml-заявлений Росреестра.
В результате сравнения данных для соответствующей территории из кадастрового плана территории в локальной системе координат и данных из SAS. Планеты с подключенным слоем кадастрового зонирования территории, оказалось, что параметры остаются приблизительными при использовании в Mapinfo.
% PDF-1.4 % 342 0 объект > эндобдж xref 277 66 0000001792 00000 н. 0000002547 00000 н. 0000003138 00000 п. 0000003923 00000 н. 0000004346 00000 п. 0000009641 00000 п. 0000009847 00000 н. 0000009950 00000 н. 0000010218 00000 п. 0000010796 00000 п. 0000011572 00000 п. 0000012016 00000 п. 0000017887 00000 п. 0000018387 00000 п. 0000018715 00000 п. 0000021722 00000 п. 0000021912 00000 п. 0000022173 00000 п. 0000022668 00000 п. 0000023445 00000 п. 0000023861 00000 п. 0000028382 00000 п. 0000028610 00000 п. 0000028927 00000 н. 0000030210 00000 п. 0000031077 00000 п. 0000031279 00000 п. 0000032012 00000 н. 0000040713 00000 п. 0000041124 00000 п. 0000041428 00000 п. 0000043989 00000 п. 0000044083 00000 п. 0000044179 00000 п. 0000137029 00000 н. 0000137690 00000 н. 0000138364 00000 н. 0000138964 00000 н. 0000139548 00000 н. 0000140181 00000 п. 0000140885 00000 н. 0000141574 00000 н. 0000142191 00000 п. 0000142311 00000 н. 0000142374 00000 н. 0000143260 00000 н. 0000143316 00000 н. 0000143897 00000 н. 0000143966 00000 н. 0000144220 00000 н. 0000144283 00000 н. 0000144441 00000 н. 0000144561 00000 н. 0000144694 00000 н. 0000144806 00000 н. 0000144869 00000 н. 0000144961 00000 н. 0000145024 00000 н. 0000145138 00000 н. 0000145279 00000 н. 0000145340 00000 н. 0000145460 00000 н. 0000145601 00000 н. 0000145703 00000 н. 0000002086 00000 н. 0000000017 00000 н. трейлер ] >> startxref 0 %% EOF 277 0 объект > / PageMode / UseOutlines / OpenAction [278 0 R / FitH 794] / Нитки 168 0 R / Контуры 324 0 R / Страницы 167 0 R / PageLabels 274 0 руб. >> эндобдж 341 0 объект > ручей xM (q
Мозг, пораженный болезнью Альцгеймера: наличие олигомерных лигандов Aβ (ADDL) предполагает молекулярную основу обратимой потери памяти
Abstract
Молекулярная основа нарушения памяти при болезни Альцгеймера (БА) была установлена. недавно выдвинута гипотеза, в которой значительная роль отводится малым, растворимые олигомеры амилоидного β-пептида (Aβ).Олигомерный Aβ лиганды (также известные как ADDL), как известно, являются мощными ингибиторами гиппокампа. долгосрочное потенцирование, которое является парадигмой синаптической пластичности, и был связан с потерей синапсов и обратимым нарушением памяти у трансгенных мышей. Модели AD. Если такие олигомеры накапливаются в человеческом мозгу, их неврологическое воздействие может стать недостающим звеном в жизни бедных корреляция между деменцией AD и амилоидными бляшками. Эта статья, используя антитела, индуцированные против синтетических олигомеров Aβ, подтверждают предсказанное накопление растворимых олигомеров в лобной коре БА.Олигомеры в AD достигают уровни до 70 раз по контролю над мозгами. Мозговые и синтетические олигомеры демонстрируют структурную эквивалентность по массе, изоэлектрической точке, и распознавание конформационно-чувствительными антителами. Оба олигомера, кроме того, демонстрируют те же поразительные образцы привязанности к культурным нейроны гиппокампа, связывающиеся на поверхности дендритов в небольших кластерах с лигандоподобная специфичность. Анализы связывания с использованием солюбилизированных мембран показывают олигомеры должны быть лигандами с высоким сродством к небольшому количеству неизбыточных белки.Текущие результаты подтверждают предположение, что растворимые олигомерные Лиганды Aβ являются неотъемлемой частью патологии БА и подтверждают их использование в новых подходы к терапевтическим препаратам и вакцинам против БА.
Болезнь Альцгеймера (БА) — прогрессирующее слабоумие, наиболее раннее проявление — сбой памяти. От БА нет лекарства, и его молекулярная основа еще не создана. Однако многочисленные свидетельства указывают на то, что болезнь вызвана нейротоксическими ансамблями амилоида из 42 аминокислотных остатков. β-пептид (Aβ) (1-3).
Aβ _1-42 — амфипатическая молекула, происходящая из специфический протеолитический процессинг его трансмембранного белка-предшественника (белок-предшественник амилоида, APP) (4). Потому что мутации в APP вызвать подмножество семейной AD (5), а также вызывают повышенное накопление Aβ _1-42 (6), обширные усилия по последние 15 лет пытались установить патогенные механизмы, которые связывают Aβ с AD. Aβ _1-42 проявляет замечательную способность к самоассоциация (7), которая приводит к образованию крупных нерастворимых амилоидных фибрилл, обнаруживаемых при невритной болезни Альцгеймера. бляшки (8, 9).Подобные фибриллы собираются in vitro из синтетического пептида (10). Самоассоциация функционально значим, потому что основополагающие исследования десятилетней давности (11, 12) определил, что решения содержащие большие фибриллы Aβ убивали культивируемые нейроны, тогда как растворы мономера были безобидными. Гипотеза амилоидного каскада, сформулированная в 1992 г. (13) взяли эти нерастворимые амилоидные фибриллы как основные молекулярные возбудители БА. Хотя стимулирующий В результате обширных исследований предполагаемая роль амилоидных фибрилл не была изучена. принято.Существенным недостатком была слабая корреляция между неврологический дефицит и отягощение амилоидными бляшками (14), несоответствие резюмировано на моделях БА у трансгенных мышей (человека) hAPP (15, 16).
Недавно гипотеза амилоидного каскада была изменена, чтобы включить дополнительные патогенные сборки Aβ, которые по структуре сильно отличаются от амилоидные фибриллы (1, 16). Токсины включают растворимые олигомеры Aβ. В отличие от крупных и заметных отложений фибрилл, олигомеры не будут обнаружены в типичных анализах патологии и, следовательно, будут представляют собой, по сути, недостающие звенья в патогенном каскаде (17).Неврологически деструктивная природа олигомеров Aβ была установлена на различных моделях. Полученные экспериментально олигомеры наносили на срезы мозга или вводили в vivo вызывает неэффективность долгосрочной потенциации гиппокампа (ДП) (18-20), который является формой хранения синаптической информации, известной как парадигма для механизмы памяти. Растворимые олигомеры также участвуют в физическом дегенерация синапсов (15) и возрастной недостаточности памяти у трансгенных мышей hAPP (21-23).В двух исследованиях (22) память неэффективность у мышей hAPP была фактически устранена с помощью Aβ-антител, что примечательно восстановление, которое произошло без снижения уровня амилоидных бляшек. В одном случае восстановление наблюдалось у мышей с бляшками в течение 24 часов после однократного Инъекция Aβ-антитела. Устранение нарушения памяти антителами у мышей модели подтвердили прогнозы, разработанные ранее на основе исследований олигомеров и ДП (16, 18) и согласуется с появившаяся концепция, что БА — это синаптическая недостаточность, вызванная олигомерами (24).
Неврологические повреждения олигомерным Aβ в экспериментальных моделях имеют подчеркнули необходимость определения количества и свойств олигомеров в человеческий мозг. С помощью иммуноанализа, чувствительного к олигомерам, эта статья подтверждает: что человеческий мозг содержит легкорастворимые олигомеры Aβ, уровни которых сильно повышен в нашей эры. Олигомеры из головного мозга AD проявляют свойства, эквивалентные синтетических олигомеров, включая поразительную способность присоединяться к нейроны в небольших скоплениях участков поверхностного связывания.
Материалы и методы
Aβ _1-42 был получен из American Peptide (Саннивейл, Калифорния), California Peptide Research (Напа, Калифорния) или Рекомбинантный пептид (Афины, Джорджия). Среда Ham’s F-12, не содержащая красного фенола, была получена от Bio-Source International. (Камарильо, Калифорния). Hibernate был от Life Technologies (Роквилл, Мэриленд). Добавки нейробазала, лошадиной сыворотки и B27 были от Invitrogen. Все остальные реагенты для клеточных культур были от Mediatech (Herndon, VA). Если иначе указано, химические вещества и реагенты были от Sigma-Aldrich.Сотовый пролиферация (3- (4,5-диметилтиазол-2-ил) -2,5-дифенилтетразолий бромид; MTT) был изготовлен компанией Roche Boehringer Mannheim (Индианаполис). Кумасси Плюс и анализы белка бицинхониновой кислоты (BCA), а также Super-Signal West femto Набор для хемилюминесценции был от Pierce. SDS / 4-20% PAGE Трис-глициновые гели, 2D полоски и буферы были от Bio-Rad. Hybond усиленная хемилюминесценция (ECL) вторичные нитроцеллюлозы и пероксидазы хрена (HRP) были получены из Amersham Pharmacia Biosciences.Олигомер-селективные антитела (M93 и M94) были произведены и охарактеризованы ранее (25). Алекса Флуор Вторичное антитело, конъюгированное с 488, было получено от Molecular Probes. Приуроченная беременность Крысы Sprague-Dawley были получены из лабораторий Charles River Breeding Laboratories. Образцы лобной коры и мозжечка из контроля, соответствующего возрасту и возрасту. мозг был получен из Северо-Западного центра болезни Альцгеймера. Neuropathology Core и хранили при -80 ° C до использования. Синтетический Диффузные лиганды на основе Aβ (ADDL) получали согласно опубликованные протоколы (25, 26).
Культура клеток. Клетки гиппокампа получали и поддерживали согласно Brewer et al. (27), используя (0,002%) Покрытые поли-L-лизином покровные стекла с плотностью 1,8 × 10 ⁴ клеток на см ² в нейробазале с добавками B27 и l-глутамин (2,5 мкМ). Корковые и мозжечковые клетки были культивировать, как описано (28), с культурами мозжечка, получавшими более высокий KCl (25 мМ). Клетки подвергались воздействию 5 мкМ цитозинарабинонуклеозида (araC) в течение 24 ч, затем 2.5 мкМ araC на 24 часа. Для анализа метаболической активности клетки высевали на 24-луночные планшеты, покрытые поли-L-лизином, с плотностью 0,4 × 10 ⁶ клеток на лунку. Когда были добавлены ADDL, среда была изменена на Среда F12 с 50 или 100 нМ синтетических ADDL (плюс 25 мМ KCl для мозжечка). культур), а метаболическую активность (снижение МТТ) измеряли через 48 ч с помощью с помощью набора для пролиферации клеток в соответствии с инструкциями производителя.
Иммуноцитохимия. Культуры однократно промыли культуральными средами. и исправлено с помощью 3.7% формальдегид. Покровные стекла были промыты, проницаемы. с 0,1% Triton X-100 в 10% нормальной козьей сыворотке и PBS (NGS: PBS) в течение 90 мин. при комнатной температуре, иммуномечен поликлональным антителом M94 (1: 500) в течение ночи при 4 ° C с последующей инкубацией с Alexa Fluor 488 антикроличий (2 мкг / мл) в течение ∼3 ч при комнатной температуре. Клетки были промыты, закреплены реагентом ProLong и визуализированы с помощью программное обеспечение для визуализации метаморфов (Universal Imaging, Media, PA).
Подготовка мембраны. Все манипуляции с мозгом человека и взрослой крысы тканей выполняли при 4 ° C. Мозжечок, кора и гиппокамп были гомогенизировали в 20 объемах буфера A (PBS, pH 7,4 / 0,32 М сахароза / 50 мМ Hepes / 25 мМ MgCl ₂ / 0,5 мМ DTT / 200 мкг / мл PMSF / 2 мкг / мл пепстатина A / 4 мкг / мл лейпептина / 30 мкг / мл бензамидина гидрохлорида), и были центрифугировали при 1000 × g в течение 10 мин. Гранула была повторно гомогенизировали в 10 об. буфера А и снова центрифугировали. Комбинированный супернатанты центрифугировали при 100000 × g в течение 1 ч, а осадок использовали для общей мембранной фракции.
Экстракты тканей. Фронтальная кора головного мозга AD или контрольного мозга (0,2 г) была гомогенизированный в 20 объемах F12, содержащего ингибиторы протеаз (как указано выше), и центрифугировали при 100000 × g в течение 1 ч. Гранула была повторно гомогенизировали в 10 объемах F12 плюс ингибиторы протеазы и были недавно центрифугированные. Концентрация белка в объединенных супернатантах составляла определенный. Затем аликвоту белка (1,8 мг) концентрировали до объема 60 мкл или меньше, используя концентратор Centricon-10.
2D Электрофорез. Белки экстрактов растворимых корковых тканей (1,8 мг) были разделены согласно опубликованным процедурам (29), используя Bio-Lytes амфолиты-носители, pH 3-10. Синтетические ADDL, 1 нмоль в 10 мкл F12, были обрабатывались точно так же, как кора головного мозга, и окрашивались серебром, как описано (25).
Иммуноанализы. Блоттинг лигандов основан на опубликованных процедурах. (30). Мембранные препараты были экстрагированы моющим средством (31) 15 мин на льду, затем солюбилизированные белки (75 мкг, если не указано иное) разделяли SDS / PAGE в течение 3-4 ч при 120 об. И переносили на нитроцеллюлозу.Кляксы инкубировали с трис-буферным физиологическим раствором (TBST), содержащим 5% обезжиренного сухого молока. в течение ночи, трижды промывали холодной средой F12 и инкубировали с 10 нМ ADDL в течение 3 часов при 4-8 ° C. После смывания несвязанного материала с помощью TBST, связанные ADDL были помечены M93 (1: 1000) и визуализированы с помощью усиленного хемилюминесценция. Иммуноблоты и дот-блоты были выполнены, как описано. (25, 30).
Результаты
Иммуноанализ для сборок растворимых A β . Разработать чувствительный анализ на низкие уровни олигомеров, мы сначала получили антитело (R165), как известно, связывает Aβ в вестерн-блоттинге на фемтомолярных уровнях. (32). Это антитело, хотя высокочувствительный, доказал селективный по отношению к мономерам. Поэтому мы вакцинировали кролики с полноразмерными олигомерами Aβ _1-42 для образования чувствительные антитела, специфичные для собранных форм Aβ (M71, M93 и M94). Специфичность R165 и олигомерных антител M93 к проиллюстрированы различные формы Aβ. (Рис.1 А ). В преобладающим олигомером, обнаруженным в этом препарате, был тетрамер, наиболее обильные олигомеры образуются в холодных растворах. В зависимости от условий стабильный олигомеры до 24-мер были обнаружены с тримером, тетрамером и 12-мерным обычно наблюдается (ссылка 26; см. также рис. 3). Специфичность М93 для собранных форм Aβ был неотличим от других полученные олигомерами кроличьи антитела (M71 и M94). Точечный иммуноблоттинг с эти конформационно-чувствительные антитела выявляли олигомеры при <0.1 фмоль (общий Aβ; рис. 1 B ) с большой специфичностью. Сигнал в мономере препараты были по крайней мере на три порядка менее чувствительны и вероятно, из-за следовых количеств олигомера. Точечные иммуноблоты для олигомеров были линейно по крайней мере для 100-кратного диапазона (данные не показаны), что делает анализ полезным для определения относительных уровней в экстрактах головного мозга.
Рис.1.
Селективный, чувствительный дот-блот-анализ собранных форм растворимых Aβ _1-42. ( A ) Иммуноблот препаратов ADDL (100 fmol) показывает, что антитело M93 избирательно идентифицирует олигомеры ( справа ), тогда как антитело R165 идентифицирует только мономер ( Левый ).( B ) Иммуноанализ дот-блоттинга с использованием M93 выявляет ADDL. с чувствительностью 1 фмоль, но обнаруживает мономеры только на 1000-кратном уровне выше.
Рис 3.
Собранные формы растворимого Aβ в головном мозге AD обнаруживают идентичность с синтетическим Олигомеры Aβ. 2D иммуноблоты растворимого белка из коры головного мозга AD ( A ) или контрольной коры ( B ) и окрашивание синтетическим серебром ADDL ( C ). Экстракт AD и синтетические ADDL демонстрируют выдающийся 53 кДа белок при pI 5.6, что соответствует предполагаемому 12-меру Aβ _1-42.
Повышенное содержание растворимых олигомеров A β в AD. Дот-блот-анализ были использованы для тестирования собранных форм Aβ в растворимых экстрактах человека. лобная кора. Пять образцов AD сравнивали с контрольной группой того же возраста. К наилучшее сохранение in vivo условиях, кортикальная ткань гомогенизирована без детергента в среде для культивирования нервных клеток. Растворимые фракции были прозрачными супернатанты от 100000 × г 60-минутных вращений.Иммунореактивность был устойчивым в экстрактах головного мозга AD, но был близок к фону для контроля (Рис. 2). По сути идентичны результаты были получены в трех отдельных испытаниях. Средние показатели населения для AD головного мозга были в 12 раз выше, чем для контрольного мозга ( P <0,001). Некоторые у контрольных субъектов обнаруживались олигомеры, но на уровнях ниже, чем у любых Тема AD. Различия между индивидуальными AD и контрольными образцами были столь же значительными. как в 70 раз.
Рис.2.
Мозг с поражением нашей эры ассоциирован с большим увеличением собранных форм растворимый Aβ.( A ) Дот-блот-иммуноферментный анализ ансамблей Aβ в растворимые экстракты пяти головного мозга с поражением БА и пяти контрольных животных соответствующего возраста мозг (1 мкг общего экстрагированного белка мозга на точку). ( B ) Результаты денситометрической визуализации этих же образцов. Линия указывает среднее значение каждого набора.
Состав олигомеров, полученных из AD. Чтобы проверить, что иммунореактивность из головного мозга БА (рис. 2) только олигомерам, а также для получения дополнительной информации о молекулярных состав, растворимые экстракты концентрировали, разрешили методом 2D электрофорезом, и были проанализированы иммуноблоттингом.Экстракты головного мозга AD содержал заметный олигомер ~ 56 кДа и pI 5,6 (Рис.3 A ), тогда как контрольный мозг не показал иммунореактивного материала (Рис.3 B ). Отсутствие фибрилл в растворимых фракциях головного мозга при AD соответствовало использованию мягких, условия экстракции без моющих средств и высокоскоростное ультрацентрифугирование. Высокоскоростные гранулы, содержащие амилоидную фракцию, имели обильное иммунореактивный материал не может проникать в гели SDS / PAGE (см. Рис.6). Добавление сильного детергент (1% SDS) к протоколу экстракции дал супернатанты без фибрилл с дополнительными олигомерными видами (4-мерами и 24-мерами, помимо 12-меров), но нельзя быть уверенным, что они имели естественное происхождение.Подтверждение того, что иммунореактивные молекулы в легкорастворимых экстрактах были олигомерами Aβ. установлено сравнением с синтетическими препаратами Aβ (Рис.3 C ). Как указано в другом месте (26), физиологические температура способствует накоплению 12-мера в синтетических препаратах, что было наиболее распространены здесь. Выдающаяся иммунореактивная молекула в растворимом мозге при БА Таким образом, экстракты были идентифицированы как Aβ 12-мер ( M _r = 53 ± 4 кДа для трех испытуемых).
Рис.6.
Сравнительный анализ наложения лигандов с использованием мембранных белков крысы и человека. ( A слева ) Синтетические лиганды и мембраны крысы. Показано наложение анализ с синтетическими олигомерами Aβ и тотальными мембранами головного мозга крысы или фракции, обогащенные рафтами. Дополнительное связывание было очевидно на p100, полоса не всегда обнаруживается; сравните с рис. 5 А . Связывание на p140 и p260 было обогащено рафтами. ( A Right ) Человеческие лиганды и мембраны крысы. Показан анализ наложения с растворимыми экстрактами человеческого мозга (AD или контроль), нанесенными на мозг крысы мембраны (полные мембраны или рафты).AD-растворимые экстракты показали заметное связывание на p100, но связывание на p140 и p260 связывание было очевидным в целом мембраны и в плотах. В экстрактах из контрольного мозга сигнала не обнаружено. ( B Left ) синтетические лиганды и человеческие мембраны. Показано наложение анализ с использованием общих мембран, осажденных из головного мозга человека, и 10 нМ синтетического ADDL. Сравнение контрольных субъектов и субъектов с БА показало меньшее количество сайтов связывания в AD (обратите внимание на фибриллярный амилоид во фракции мембран AD; верхняя часть геля). ( B Право ) Денситометрическое количественное определение p140 и p260 подтвердило меньшее количество сайты связывания в головном мозге AD.
Лигандоподобное прикрепление олигомеров к нейронам при кластерном связывании Места. В дальнейших испытаниях олигомеров, полученных из AD, мы исследовали их привязанность к культивируемым нейронам. Олигомеры Aβ потенциально могут присоединяться неспецифически путем введения в липидные бислои (33, 34), или, альтернативно, действуют как специфические лиганды для определенных участков связывания на поверхности (18). Экстракты мозга были инкубировали с культивированными нейронами гиппокампа крысы в течение 5 мин, промывали и иммуномеченые без пермеабилизации.Выраженное связывание было очевидно для AD экстрактов, но не для контролей (рис. A по сравнению с B ). Переплет был сильно узорчатым, происходит в небольших кластерах сайтов связывания. Идентичные модели имели место для синтетические олигомеры (рис. 4 C ) и наблюдались при дозах всего 20 нМ (всего Aβ). Связывание точечного соединения отсутствовало, если олигомеры были предварительно инкубированы с первичные антитела (рис. 4 D ), что исключает возможность связывания неспецифический из-за наличия необычно липких молекул.Привязка puncta были наиболее многочисленны в нейритах (показаны здесь z — срезы, полученные конфокальной визуализацией), и напоминали сигнальные таких специализаций, как кластерные рафты или синаптические терминалы. Привязка была устойчивы в культурах гиппокампа и коры головного мозга, но не в культурах мозжечка (данные не показаны), и даже в культурах гиппокампа многие нейроны проявляли без привязки. Таким образом, олигомеры были специфическими лигандами клеточной поверхности, которые были в соответствии с предыдущими прогнозами (16, 18) в зависимости от размера олигомера и диффузионность.Идентичные паттерны нейронного прикрепления синтетических и олигомеры, происходящие из AD, предполагают конформационную эквивалентность.
Рис.4.
ADDL из головного мозга при болезни Альцгеймера или полученные in vitro показывают идентичный пунктат связывание с белками нейрональной клеточной поверхности. Культивированные нейроны гиппокампа были инкубируют с растворимыми экстрактами головного мозга человека или синтетическими ADDL. Привязка была визуализируется иммунофлуоресцентной микроскопией с использованием антитела M93. Растворимый AD-белки головного мозга ( A ), растворимые контрольные белки головного мозга ( B ), синтетические ADDL ( C ) и синтетические ADDL ( D ), предварительно обработанные (1 h) с олигомер-селективным антителом M71.Маленькая точка, обычно <1 мкм и в основном распределены вдоль нейритов, очевидны для AD. экстракты и синтетические ADDL, но не для контрольных экстрактов или предварительно обработанные антителами ADDL. (Бар, 10 мкм.)
Проточная цитометрия установлена ранее (18) связывание синтетических олигомеры интактных клеток были трипсин-чувствительными. Чтобы проверить, действительно ли олигомеры могут действовать как лиганды для определенных белков, мы разделили мембранные белки с помощью SDS / PAGE и проводили анализы наложения лигандов.Подобно Вестерн-блоттингу, за исключением промежуточного этапа связывания лиганда, оверлейные анализы могут выявить специфические белок-белковые взаимодействия (30, 35). Условия анализа для связывание с высоким сродством были разработаны с использованием синтетических олигомеров и крысиного белки мембраны головного мозга. При низких дозах (10 нМ общий Aβ) связывание было наиболее сильным. видны на двух ненасыщенных полосах с более высокой молекулярной массой (p140 и p260). Сигнал зависел от уровня мембранного белка на лунку. (Фиг.5 A ) и олигомер дозировка (полумаксимальное связывание ∼10 нМ; Инжир.5 C ), и был чувствительный к трипсину (данные не показаны). Связывающие белки не были в изобилии (Рис.5 A ; сравните с Краситель кумасси синим белком), при этом они не были необычно липкими, потому что контроли на связывание антител в отсутствие олигомеров были отрицательными (например, Рис.5 B Центр ). Сайты связывания были заметны в гиппокампе и кортикальном слое. мембраны, но не оболочки мозжечка (Рис.5 A и В ). Региональная экспрессия параллельна чувствительности к олигомерная токсичность, которая была очевидна в корковых культурах, но не в мозжечке. культуры при низких дозах олигомеров (рис.5 C Врезка ).
Рис.5.
ADDL представляют собой лиганды с высоким сродством к определенным солюбилизированным белкам из области мозга крыс, чувствительные к токсичности ADDL. ( A ) Кумасси синий окрашивание или анализ наложения с использованием SDS / PAGE-разделенных мембранных белков крысы гиппокамп (h2-4; 12,5, 25, 50 и 75 мкг) или мозжечок (Cb; 75 мкг). Лиганды представляли собой синтетические ADDL (10 нМ). Иммунодетекция использовала Aβ зависимые от сборки кроличьи поликлональные антитела. Выборочная привязка на p140 и Полосы p260 кДа ( * ) были легко обнаружены в гиппокампе, но не в мозжечок.Связывающие белки были не в большом количестве, что было показано сравнением с общими белками гиппокампа, окрашенными кумасси синим. ( B ) Наложение анализов, как в A , с использованием 75 мкг мембранных белков крысы кора (Cx) или мозжечок (Cb). Связывание в полосах p140 и p260 было очевидно в кора головного мозга, но не мозжечка. Без олигомеров (-ADDL) сигнал от Было обнаружено вторичное антитело, конъюгированное с пероксидазой хрена. ( С ) Денситометрия синтетического связывания с p140 коры головного мозга крысы с использованием возрастающих доз синтетических ADDL.Половина максимального связывания составляла ~ 10 нМ. ( Вставка ) Влияние ADDL на снижение MTT в кортикальном слое крыс ( слева, ) и культуры мозжечка (, правый, ) показывают, что ADDL были избирательно токсичны к кортикальным клеткам, с максимальным ответом на 50 нМ. Снижение контрольной МТТ было принято за 100%.
Синтетические олигомеры в некоторых экспериментах связывались с третьей полосой (p100), хотя связывание было менее благоприятным, чем с p140 и p260 (Рис.6 A слева ).В отличие от связывания p140 и p260, сайты p100 были очевидны в мозжечок, а также в коре и гиппокампе. Другое отличие заключалось в том, что Сайты связывания p140 и p260, но не p100, были обогащены в препаратах рафта. Плоты связаны с передачей сигналов (36), аспекты Aβ метаболизм (37, 38) и организация синапсов (39). Шаблоны наложения были отличается для олигомеров, происходящих от AD, которые связывают те же три полосы, что и синтетические олигомеры, но наиболее прочно связываются с p100 (Рис.6 A Правый ).Было ли затронуто оверлейное связывание олигомеров, происходящих из AD о дополнительных белках в экстрактах пока не известно. Однако привязка была полностью зависит от болезни, так как контрольные экстракты не показали сигнала.
Тесты наложения для связывания синтетических олигомеров с мембраной человека белки показали сохранение корковых сайтов на p140 и p260 (Рис.6 B слева ), которых, как показано, было больше в контрольном мозге чем мозг AD. Снижение относительного количества сайтов связывания p260 и p140 в пять образцов AD по сравнению с пятью нормальными образцами пожилых людей (Рис.6 В Правый ; P <0,05 для p260 и P <0,01 для p140 с использованием критерия Стьюдента t ) соответствовал возможному возникновению олигомерных связывающих белков на клетках, уязвимых к дегенерации при AD.
Обсуждение
Это исследование показало, что мозг, пораженный БА, демонстрирует поразительное увеличение растворимый олигомерный Aβ, при этом олигомеры, производные от AD, неразличимы из синтетических молекул с точки зрения структуры и избирательного присоединения к поверхности нервных клеток.Эти результаты подтверждают гипотезу. участие олигомеров в БА, и обосновать потенциал олигомеров как новые мишени для открытия лекарств от БА. Накопление олигомеров Aβ при БА обеспечивает прецедент, кроме того, что субфибриллярные сборки, которые теперь идентифицированы для множественные амилоидогенные белки (40) могли быть патогенными значительный.
Уровни растворимых олигомеров Aβ не показали перекрытия между образцами AD и контрольные группы соответствующего возраста с максимальной разницей> 70 раз.Некоторые контроли показали умеренно повышенное содержание олигомеров. Хотя было предложено, чтобы олигомеры играют роль на самых ранних стадиях БА и даже на ранних стадиях БА. дисфункции (26), это будет трудно протестировать без клинически полезных анализов. Наращивание олигомеров при AD патология согласуется с результатами моделей БА у трансгенных мышей, в которых олигомеры увеличиваются в 100 раз в зависимости от региона (41). Сбой памяти в трансгенные мыши служат моделью для ранней БА и ее замечательного обращения за счет Aβ-направленные антитела связывают с иммунонейтрализацией растворимые ансамбли Aβ (23).Реверс в моделях мышей предполагает возможность того, что временные изменения в уровнях олигомеров у человека мозг может вызвать колебания в работе памяти.
Сравнение синтетических олигомеров и олигомеров, полученных из AD, показало структурные эквивалентность. Предыдущие исследования (26) отметили, что размеры синтетические олигомеры подвержены влиянию множества факторов и варьируются от тримера до 24-мер. Для экстрактов головного мозга AD и синтетических препаратов, изготовленных по В условиях биоанализа 2D-электрофорез показал заметные 12-меры при pI 5.6. Хотя используемое антитело может определять наличие больших амилоидных фибрилл. (например, рис. 6), 2D-блоты установили, что растворимые фракции головного мозга AD не содержат фибриллярных и протофибриллярные виды Aβ. Протофибриллы, которые могут быть неврологически активные (42), были сообщается, что происходит в спинномозговой жидкости (43). Сильное моющее средство (SDS) высвободили дополнительные олигомеры из мозга при БА, что указывает на то, что некоторые олигомеры были прочно связаны с другими молекулами. Поскольку олигомеры человека не были очищены, они не могли сравниться с синтетическими олигомерами по внешнему виду шаров атомно-силовая микроскопия, и их нельзя было проверить на нейротоксичность.Один разница, отмеченная между синтетическими олигомерами и олигомерами, полученными из AD, была большей связывание производных от AD молекул с полосой p100 в тестах наложения. Основа поскольку разница неизвестна, но, вероятно, может происходить из нескольких компоненты, присутствующие в экстрактах AD. В целом иммунохимические анализы обозначили структурную эквивалентность, которая была продемонстрирована перекрывающейся массой, pI ценности, распознавание конформационно-чувствительными антителами и способность действовать в качестве специфических лигандов для определенных сайтов связывания.Особенно поразительным было эквивалентный паттерн присоединения синтетических олигомеров и олигомеров, полученных из AD, к поверхности нейрональных клеток.
Хотя было высказано предположение, что токсичный Aβ действует, непосредственно вставляя в мембранные липиды (33, 34) текущие данные показывают олигомеры являются специфическими лигандами для дискретно сгруппированных клеточных поверхностей. молекулы. Оверлейные анализы также показали, что олигомеры действуют как лиганды с высоким сродством. для небольшого количества солюбилизированных мембранных белков. Связывание с клетками и солюбилизированные белки блокировались антителами, что исключает простую адсорбцию на липких сайтах.Связывание с p140 и p260 проявляет свойства, указывающие на физиологическая релевантность (высокое сродство, соответствующая региональная экспрессия, плот ассоциации, сохранении видов и снижении БА), но действительно ли они опосредованное связывание, наблюдаемое под микроскопом, требует дальнейшего изучения.
Размер и узорчатое распределение прикрепления клеточной поверхности сильно предполагает физиологическое значение. В поддержку этой возможности недавние подробные учеба с синтетические олигомеры, примененные к дифференцированным культурам нейронов гиппокампа, имеют показана совместная локализация сайтов связывания с синаптическим маркером PSD-95.Нацеливание олигомеров на синапсы подтвердило бы гипотезу о том, что AD находится в большая часть синаптической патологии (24), и будет согласовано с их быстрым избирательным ингибированием LTP (18, 19). Молекулярные изменения после привязанности плохо изучены, хотя сигнальные каскады необходимы для по-видимому, вовлечена синаптическая пластичность. привязка элемента cAMP-ответа передача сигналов белка (CREB) ингибируется недегенеративными дозами Aβ в условиях, которые производят олигомеры (44). Гипотетически, ингибирование передачи сигналов CREB может происходить из замещения Fyn (45), что обычно прикреплены PSD-95 к сигнальным каркасам (46) и был связан с олигомер-индуцированная гибель нейронов (18), экспериментальная память дефицит (47) и AD патология (48).Торговля рецепторы также могут быть затронуты. Олигомеры блокируют обращение долгосрочного депрессия (LTD) (20), а также как формирование ДП. Эти явления связаны с глутаматом. вставка рецептора в постсинаптические мембраны (49), процесс, связанный с Киназы семейства Src (50). Нарушение сигнализации, ответственной за изменения в LTP и LTD, в конечном итоге может привести к к дестабилизации синапсов (20). Было предложено что олигомеры Aβ ответственны за независимое от бляшек снижение уровни синапсов, наблюдаемые у мышей hAPP (15).
Поскольку олигомеры разрушают нервную систему в экспериментальных моделях и показывают значительное увеличение AD в головном мозге, они обеспечивают альтернативу бляшкам как цель для открытия лекарств. Моноклональные антитела могут обеспечить эффективное терапевтические средства, учитывая не зависящее от зубного налета обращение нарушения памяти продемонстрировано на моделях мышей AD. Одним из предварительных условий будет разработка антитела, которые нацелены на растворимые, но не нерастворимые сборки Aβ. Клинические испытания вакцины недавно были приостановлены из-за воспаления ЦНС. (51), что, вероятно, было вызвано путем связывания антител с отложениями амилоидных бляшек.Являются ли олигомеры Aβ Проявление уникальных эпитопов, отсутствующих в фибриллах, неизвестно. Прецедент, однако, происходит из прионов, которые олигомеризуются путем, отличным от их фибриллогенез (52). Если могут быть разработаны антитела, которые однозначно нацелены на олигомеры, это повысит захватывающая возможность того, что функция человеческой памяти при AD может быть сохранена безопасно, а при некоторых обстоятельствах, возможно, даже восстановлен.
Благодарности
Мы благодарим Карен Эш, Дэвида Теплоу, Кэтрин Вули, Нельсона Спрастона и Альберту Фарбману за комментарии к рукописи; Эйлин Бигио из Ядро центра патологии Альцгеймера Северо-Западного университета для анализа человеческая ткань; Джой Рамос за помощь в иммуномаркировании; Уильям Руссин из Институту биологической визуализации Северо-Западного университета за его помощь с конфокальная микроскопия; и Бретту Хроми за экспертные обсуждения ADDL структура.Работа поддержана грантами Национальных институтов здравоохранения. R01-AG18877 и P01-AG15501; Фонды Бутройда, Фейгера и Френч; Институт изучения старения; и благотворитель Северо-Западного Университет.
Сноски
↵§ Кому должна быть адресована корреспонденция. Электронное письмо: wklein {at} northwestern.edu.
Сокращения: AD, болезнь Альцгеймера; Aβ, β-амилоидный пептид; ADDL, диффундирующие лиганды на основе Aβ; APP, белок-предшественник амилоида; LTP, долгосрочное потенцирование.
↵¶ Лакор, П. Н., Виола, К. Л., Ламберт, М. П., Финч, К. Э., Краффт, Г. А. И Klein, W. L. (2002) Soc. Neurosci. Abstr. 28, 751,7.
Авторские права © 2003, Национальная академия Наук
Страница не найдена | MIT
Перейти к содержанию ↓
Образование
Исследовательская работа
Инновации
Прием + помощь
Студенческая жизнь
Новости
Выпускников
О MIT
Подробнее ↓
Прием + помощь
Студенческая жизнь
Новости
Выпускников
О MIT
Меню ↓ Поиск Меню Ой, похоже, мы не смогли найти то, что вы искали!
Попробуйте поискать что-нибудь еще! Что вы ищете? Увидеть больше результатов
Предложения или отзывы?
.
Posted in Разное
Добавить комментарий Отменить ответ
Ваш адрес email не будет опубликован. Обязательные поля помечены *
Комментарий *
Имя *
Email *
Сайт

Поиск
Найти:
Рубрики
Вторичный рынок
Гараж
Гаражи
Земельные участки
Земельный участок
Квартира
Квартиры
На вторичном рынке
Оформление гаража
Оформление квартиры
Покупка
Покупка недвижимости
Разное
Советы юриста
2019 © Все права защищены. Карта сайта
Квартиры
Гаражи
Земельные участки
Покупка недвижимости
Вторичный рынок

2 9065 9065 9065 500

CE: хлороформный экстракт; EE: этанольный экстракт; ME: метанольный экстракт; WEE: вытяжка из воды; МЫ: водный экстракт.^# NIH / 3T3: ATCC CRL-1658 — мышиный фибробласт; HeLa: ATCC CCL-2 — клетка аденокарциномы матки человека; SiHa: ATCC HTB-35 — клетка плоскоклеточной карциномы человека; PC-3: ATCC CRL-1435 — клетка аденокарциномы простаты человека; B16-F10: ATCC CRL-6475 — клетка меланомы кожи мыши; PANC-1: ATCC CRL-1469 — клетки аденокарциномы поджелудочной железы.

Экстракты

Конц.

Клеточные линии ^#

NIH / 3T3

HeLa

SiHa

PC-3

B16-F-10

PANC-1

250

100

250

901 28

100

250

100

WEE

100

500

4 WE

250

500

3.3.2. Токсичность

C. elegans Яйца

Caenorhabditis elegans имеет непроницаемую кутикулу, которая представляет собой внеклеточный матрикс коллагена, образующий многофункциональный экзоскелет, затрудняющий прохождение веществ [31].Из-за этого использовались более высокие концентрации экстракта по сравнению с анализами клеточных линий. Принимая во внимание результаты, полученные с антиоксидантами и с клеточными линиями, для оценки были выбраны экстракты EE и WE. Для этой модели концентрации экстракта 1 и 10 мг / мл использовались для оценки возможного токсического воздействия на вылупление яиц (рис. 2). По сравнению с контролем, у которого вылупление яиц составляло 70%, оба экстракта, WE и EE, имели аналогичный эффект при дозах 1 мг / мл и 10 мг / мл в диапазоне от 70% до 91% (рис. 2).Следовательно, EE и WE не оказали токсического действия на вылупление яиц в модели C. elegans .

3.3.3.
In vivo Антиоксидантная активность с использованием C . elegans Модель
Поскольку экстракты EE и WE не оказывали токсического действия на вылупление яиц и развитие эмбрионов, эти экстракты были исследованы на предмет их антиоксидантного действия in vivo у C. elegans . Для этих анализов использовали диких животных (N2), которым вводили EE и WE в концентрации 1 и 10 мг / мл.Впоследствии эти черви были проанализированы на выживаемость в условиях окислительного стресса (обработка трет-бутилгидропероксидом (t-BOOH)). Повышенная толерантность к условиям окислительного стресса, которым способствовала обработка t-BOOH, наблюдалась при обработках EE и WE (Фигуры 3 (a) и 3 (b)). Для контрольных животных, получавших EE, среднее время выживания составляло 7,5 ч по сравнению со средним временем выживания 10,5 ч для EE (1 мг / мл и 10 мг / мл), что указывает на увеличение на 28,6% (таблица 3). .
Условия выживания Среднее время выживания (часы) Вариация среднего значения выживаемости (%) Логарифмически-ранговые тесты (Mantel-Cox) значения Число погибших животные / цензуре
Контроль 7,5 80/0
EE 1 мг / мл 10,5 28,6 EE 10 мг / мл 10.5 28,6 <0,0001 80/0
Для контрольных животных в обработках WE среднее время выживания составляло 4,8 ч по сравнению с 7,9 ч и 8,2 ч для 1 мг / мл и 10 мг / мл WE, соответственно (рис. 3 (б)). Эта разница представляет собой увеличение на 39,2% (1 мг / мл) и 41,3% (10 мг / мл) при обработке t-BOOH (таблица 4).
Условия выживания Среднее время выживания (часы) Вариация среднего значения выживаемости (%) Логарифмически-ранговые тесты (Mantel-Cox) значения Число погибших животные / цензура
Контроль 4.8 80/0
WE 1 мг / мл 7,9 39,2 <0,0001 80/0
WE 10 мг / мл 41 8,2 0,0001 80/0
3.4. Фитохимические соединения, идентифицированные с помощью тонкослойной хроматографии (ТСХ)
Анализ ТСХ показал, что присутствие фенольных соединений, таких как флавоноиды и их соединения, может быть связано с антиоксидантной активностью, наблюдаемой в анализах in vitro и in vivo .Когда хроматопластинки были обнаружены с использованием серного ванилина, наблюдались красочные пятна сапонинов (CE, EE, ME и WE) и терпенов (CE, EE и ME). Кроме того, на хроматопланшетах, контактирующих с раствором хлорида железа, появлялись пятна, свидетельствующие о наличии фенольных соединений в полярных экстрактах (EE, ME, WEE и EE), а с помощью Natural A Reagent присутствие флавоноидов в полярных экстрактах было наблюдается (EE, ME, WEE и WE). Чтобы идентифицировать некоторые соединения, присутствующие в полярных активных экстрактах, стандарты были использованы в анализе ко-ТСХ, а витексин (зеленый флуоресцентный) и изовитексин (зеленый флуоресцентный) были обнаружены в EE и ME.Наблюдалось присутствие фенольных и флавоноидов во всех полярных экстрактах, особенно EE и ME.
3.5. WE Chemical Profile by HPLC-DAD
Основываясь на результатах, полученных с помощью анализов in vitro и in vivo для EE и WE и традиционного народного способа получения экстрактов путем мацерации в воде, мы выбрали WE для дальнейшей характеристики с помощью высокой — высокопроизводительная жидкостная хроматография (HPLC-DAD), поскольку ТСХ показала присутствие витексина и изовитексина.
HPLC-DAD показал несколько пиков (рис. 4), которые оценивали при различных УФ-спектрах (228–352 нм).По сравнению со стандартами, пик №2 соответствовал галловой кислоте (-280 нм), пик №16 соответствовал p, -кумаровой кислоте (-280 нм), а пик №19 — витексину (-280-352 нм). Присутствие витексина согласуется с данными ТСХ.

3.6. Биоинформатический анализ
Биоинформатика — отличный инструмент для сбора данных о потенциальных целях с учетом двух биоактивных молекул, которые были идентифицированы в экстрактах C. alnifolia : витексин и изовитексин.База данных Киотской энциклопедии генов и геномов (KEGG) использовалась для определения возможных мишеней для этих биоактивных молекул. Эти молекулы могут быть связаны с путями, связанными с иммунной системой, сердечно-сосудистыми заболеваниями, сигнальными путями, раком, нервной системой и другими. Было выполнено более 32 целей (таблица 5). Когда было проанализировано перекрытие между мишенями, наблюдались несколько генных мишеней, таких как IKBKB, PTGS2, RELA, TNF, MAPK7, AR и NF-B (таблица 5 и рисунок 5). Кроме того, биоинформатический подход предполагает, что биоактивные молекулы, идентифицированные в C.alnifolia может обладать как антиоксидантной, так и противовоспалительной активностью.
12 9065ELKA TNF
KEGG Brite ( Homo sapiens ) Скорректированное значение Скорректированное значение Родственные гены (цели)
2.36-10 IKBKB; PTGS2; RELA; TNF; MAPK7
Передача сигнала 1.37-09 6.97-08 ИКБКБ; ПТГС2; РЕЛА; TNF; MAPK7
Сердечно-сосудистые заболевания 4.96-09 1.30-07 IKBKB; RELA; TNF; MAPK7
Лекарственная устойчивость: противоопухолевый 1.68-08
Вирусная инфекционная болезнь 3.30-08 6.17-07 IKBKB; PTGS2; RELA; TNF
Инфекционная болезнь: бактериальная 8.65-07 5.67-06 IKBKB; RELA; TNF
Инфекционное заболевание паразитарное 2.05-07 2.24-06 PTGS2; RELA; TNF; IKBKB
Эндокринная система 1.67-07 2.08-06 IKBKB; RELA; TNF
Сигнальный путь 1.74-07 2.08 IELB Развитие и восстановление 1.02-06 6.37-06 IKBKB; RELA; TNF
Болезнь человека: рак 4.00-07 4.03-06 IKBKB; PTGS2; RELA; MAPK7
Эндокринные заболевания и заболевания обмена веществ 6.20-07 4.77-06 IKBKB; RELA; TNF
Нервная система 8.24-07 5.67 IELAPB 5.67-06 90KA
Рост и гибель клеток 1.22-06 7.27-06 IKBKB; RELA; TNF

4.Обсуждение
Coccoloba alnifolia использовалась в народной медицине на северо-востоке Бразилии, но нет никакой научной информации о ее химическом составе или антиоксидантной активности. В этом исследовании химический состав и биологическая активность экстрактов шести листьев были охарактеризованы с использованием ряда растворителей (от аполярного до полярного серийного подхода) [32]. Химический анализ показал наличие сахаров, белков и фенольных соединений. Доля этих компонентов в экстрактах варьировалась; Экстракты EE, ME, WEE и WE содержали большое количество сахара и умеренное присутствие фенольных соединений, тогда как протеин был очень низким во всех экстрактах.
Alam et al. [5] показали, что полярные растворители хороши для извлечения фенольных соединений, а представленные здесь данные показали более высокие концентрации фенольных соединений и флавоноидов в этих экстрактах (EE, WE, ME, WEE и WE). ТСХ также показала присутствие терпенов (CE, EE, ME и WE) и сапонинов (CE, EE, ME и WEE). При совместной ТСХ наблюдали присутствие витексина и изовитексина, в то время как ВЭЖХ-ДАД показала присутствие галловой кислоты, р, -куаровая кислота и витексин для WE.Хотя эти соединения были ранее идентифицированы у других видов Coccoloba [10, 33, 34], наши результаты являются первыми, чтобы сообщить об их присутствии у C. alnifolia . Исходя из этого, важно оценить антиоксидантную активность и другие биологические активности экстрактов C. alnifolia , которые содержат смесь биоактивных молекул, помимо витексина и изовитексина, которые были идентифицированы с помощью ко-ТСХ [35] и ВЭЖХ-ДАД для МЫ.
Полученные здесь результаты показали превосходный антиоксидантный потенциал для EE, ME, WEE и WE, особенно в отношении снижения мощности и улавливания свободных радикалов DPPH.TAC показал более высокую антиоксидантную активность в отношении EE и ME. DPPH оценивал способность образца улавливать свободные радикалы DPHH, и как анализ снижения мощности, так и анализ TAC анализировали способность образца отдавать электроны. Gusman et al. [34] наблюдали антиоксидантную активность с помощью анализа DPPH для C. cereifera, , а антиоксидантная активность с использованием DPPH также наблюдалась для других видов из Polygonaceae, таких как Rumex japonicus [36] и Polygonum maritimum [37].Эти виды использовались в традиционной медицине в Азии, Европе и Африке, подтверждая данные, полученные здесь для C. alnifolia . Антиоксидантный потенциал может быть связан с фенольными соединениями, а также с сахарами, присутствующими в экстракте, как показано корреляциями Пирсона. Выявленные сахара могут быть связаны с фенольными соединениями, которые связаны с молекулами сахара, такими как флавоноидные гликозиды, конденсированные танины и гликозидные тритерпены, что может объяснить присутствие сахаров в C.alnifolia [38, 39]. Антиоксидантный потенциал, наблюдаемый для этих экстрактов, может быть связан с различными биоактивными молекулами, которые могут действовать, улавливая свободные радикалы и уменьшая действие АФК на клетки, следовательно, поддерживая баланс между производством и деградацией [35, 40, 41].
Анализы in vitro показали, что C. alnifolia обладает интересным антиоксидантным потенциалом, а анализов in vivo с использованием клеточных линий показали, что в целом шесть экстрактов не были цитотоксичными ни для линий неопухолевых клеток 3T3, ни для Hela, SiHa. , Линии опухолевых клеток PC-3, B16-F10 и PANC.С другой стороны, Tsuboy et al. [15] наблюдали, что экстракты корней C. mollis были более цитотоксичными, чем экстракты листьев, в отношении линий опухолевых клеток HTC. He et al. [42] показали, что витексин и изовитексин являются прекрасными антиоксидантными молекулами и обладают широким спектром антиоксидантных, антипролиферативных, противовоспалительных и других свойств. Более того, было подтверждено, что экстракты из C. uvifera и C. cereifera обладают провоспалительной активностью и могут действовать на фактор некроза опухоли α (TNF- α ) [33, 34].Используемый здесь биоинформатический подход с учетом присутствия витексина и изовитексина предполагает, что экстракт C. alnifolia может действовать на TNF- α и простагландин-эндопероксидсинтазу (PTGS или COX). Хабтемариам [35] упомянул, что экстракты представляют собой смесь биоактивных молекул, которые могут действовать синергетически или по отдельности. Более того, было обнаружено, что природные продукты могут действовать на сигнальные пути, например, на сигнальный путь NF- κ B [4, 35, 43–45].Данные биоинформатики с использованием витексина и изовитексина показали, что некоторые гены-мишени были противовоспалительными генами, такими как NF- κ B и COX-2.
Кроме того, было показано, что Caenorhabditis elegans является отличной моделью для определения токсичности химических соединений. Есть некоторые анализы, которые могут показать токсичность, например, вылупление яиц и развитие нематод [46, 47]. Полученные результаты показали, что EE и WE не были токсичными, потому что они не влияли на вылупление яиц, и эти экстракты обладали защитным эффектом от окислительного стресса, когда t-BOOH использовался в качестве стрессорного агента.Эти экстракты увеличивали выживаемость на 28% для EE 1 мг / мл, на 31% для WE 1 мг / мл и на 42% для WE 10 мг / мл по сравнению с контрольными животными. Юэ и др. [48] наблюдали, что p -кумаровая кислота способна снижать окислительный стресс у C. elegans , а также увеличивать продолжительность их жизни в условиях окислительного стресса, аналогично тому, что наблюдалось в EE и WE. Choubey et al. [49] показали отличную от галловой кислоты активность из-за ее антиоксидантного потенциала. Таким образом, p -кумаровая кислота, галловая кислота и витексин могут быть некоторыми из биоактивных молекул, присутствующих в нашем экстракте, которые обладают антиоксидантным потенциалом и не токсичны, как показано в данных, представленных здесь для экстрактов Coccoloba alnifolia .
Другие исследования показывают, что фенольные соединения принадлежат к роду Coccoloba . Cota [10], работавший с C. acrostichoides , идентифицировал бетулин и β -ситостерин с помощью ТСХ. Ashmawy et al. [12] при работе с листьями C. uvifera обнаружили эллаговую кислоту, бензойную кислоту, o -кумаровую кислоту, рутин, мирицетин и кверцетин в экстрактах воды, ацетона и этанола. Кроме того, для C. mollis в листьях и побегах были идентифицированы тритерпенов, дитерпенов, антрахинонов, фитостероидов и бензолов [11].
Для C. alnifolia в настоящем исследовании наблюдались фенольные соединения, такие как галловая кислота, p -куаровая кислота, витексин и изовитексин, а ВЭЖХ-DAD показала, что существует множество других соединений, которые необходимо идентифицировать. Эти экстракты могут содержать другие биоактивные молекулы, которые могут действовать синергетически с фенольными соединениями, что приводит к окислительной защите, которая снижает эффекты ROS и помогает поддерживать окислительно-восстановительный баланс (производство ROS по сравнению с деградацией ROS) в клетках и тканях [35, 40].Представленные здесь данные показывают, что EE и WE обладают большим потенциалом в качестве природных антиоксидантных продуктов.
5. Выводы
Пять экстрактов листьев Coccoloba alnifolia были получены последовательной экстракцией (с использованием аполярных растворителей в полярные растворители), а шестой экстракт был приготовлен только с водой (на основе традиционного народного использования). Полученные здесь данные показывают, что эти экстракты содержат фенольные соединения, терпены, сапонины и флавоноиды (витексин и изовитексин). В анализах in vitro и in vivo было показано, что четыре полярных экстракта, EE, ME, WEE и WE, являются источниками молекул антиоксидантов.В целом эти экстракты не влияли на жизнеспособность шести различных клеточных линий млекопитающих. Более того, EE и WE не влияли на плодовитость нематод Caenorhabditis elegans , используемых в качестве тестовой модели, и защищали их от стрессора t-BOOH, увеличивая продолжительность их жизни. Таким образом, листья Coccoloba alnifolia обладают отличным потенциалом для разработки лекарственных трав и в качестве антиоксидантных продуктов. Другие виды биологической активности также могут быть исследованы, чтобы определить, как потенциальные антиоксиданты действуют в клетках.
Доступность данных
Данные, полученные в этом исследовании, можно получить у соответствующего автора по запросу.
Конфликт интересов
Авторы не заявляют о конфликте интересов.
Вклад авторов
S.M.Z.L., R.P.O., H.A.O.R. и K.C.S. задумал и спланировал эксперименты. L.F.M.M., D.L.G., L.F.S., L.M.P.S., M.L.M., C.O.M.C, S.M.Z.L., R.P.O., H.A.O.R. и K.C.S. провел эксперименты, проанализировал данные и написал статью.Все авторы прочитали и одобрили рукопись.
Благодарности
Авторы выражают благодарность Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES), Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico (CNPq) и Ministãnologia. Авторы выражают благодарность Алин Бертинатто Крус из Лаборатории фитокимики, Департамента ботаники, Университета Сан-Паулу (USP) за помощь в анализе HPLC-DAD.H.A.O. R. и R.P.O. являются заслуженным исследователем стипендии CNPq. L.F.M.M., L.M.P.S. и C.O.M.C. получил стипендию от CAPES.
Дополнительные материалы
Дополнительная таблица 1 показывает анализ коэффициента Пирсона для сахара, белка и фенольных соединений, представленных в каждом из экстрактов Coccoloba alnifolia . Полученные значения были показаны красным цветом, и считалось, что очень сильная корреляция — значения выше 0,9, сильная корреляция — от 0,7 до 0.9. Анализ коэффициента Пирсона показал положительную корреляцию между содержанием фенольных соединений в экстракте Coccoloba alnifolia и антиоксидантным анализом. Была сильная корреляция между TAC и анализом снижающей мощности и умеренная корреляция с улавливанием супероксидных радикалов. Кроме того, содержание сахара показало очень сильную корреляцию для анализа снижения мощности и TAC и умеренную корреляцию с улавливанием супероксидных радикалов. (Дополнительные материалы)
% PDF-1.4 % 559 0 объект > эндобдж xref 559 91 0000000016 00000 н. 0000002655 00000 н. 0000002812 00000 н. 0000004031 00000 н. 0000004162 00000 п. 0000004301 00000 п. 0000004433 00000 н. 0000004855 00000 н. 0000005483 00000 н. 0000007551 00000 п. 0000007734 00000 н. 0000008254 00000 н. 0000010155 00000 п. 0000010524 00000 п. 0000010855 00000 п. 0000011193 00000 п. 0000011336 00000 п. 0000013125 00000 п. 0000013460 00000 п. 0000015713 00000 п. 0000017705 00000 п. 0000017990 00000 п. 0000019670 00000 п. 0000021637 00000 п. 0000023473 00000 п. 0000023587 00000 п. 0000023699 00000 п. 0000023814 00000 п. 0000023884 00000 п. 0000023977 00000 п. 0000034725 00000 п. 0000034988 00000 п. 0000035203 00000 п. 0000035230 00000 п. 0000035575 00000 п. 0000035645 00000 п. 0000035740 00000 п. 0000049652 00000 п. 0000049923 00000 н. 0000050216 00000 п. 0000050243 00000 п. 0000050652 00000 п. 0000050722 00000 п. 0000050822 00000 п. 0000074656 00000 п. 0000074919 00000 п. 0000075329 00000 п. 0000075356 00000 п. 0000075870 00000 п. 0000075940 00000 п. 0000076033 00000 п. 0000088272 00000 н. 0000088550 00000 п. 0000088777 00000 п. 0000088804 00000 п. 0000089149 00000 п. 0000089237 00000 п. 0000089570 00000 п. 0000089862 00000 н. 00000 00000 п. 00000
00000 п. 00000
00000 п. 0000093231 00000 п. 0000093504 00000 п. 0000095400 00000 п. 0000095710 00000 п. 0000096625 00000 п. 0000096905 00000 н. 0000116905 00000 н. 0000117154 00000 н. 0000117617 00000 н. 0000152705 00000 н. 0000152954 00000 н. 0000153590 00000 н. 0000179645 00000 н. 0000179900 00000 н. 0000180434 00000 н. 0000193103 00000 н. 0000193359 00000 н. 0000193692 00000 н. 0000238092 00000 н. 0000238131 00000 п. 0000239901 00000 н. 0000311095 00000 н. 0000312865 00000 н. 00003